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RTM441 20bp DNA ladder
 产品货号: RTM441
 产品名称: RTM441 20bp DNA ladder
 产品价格/规格: 50次 500元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2021-05-22
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  • 20bp DNA ladder

    ● 产品编号及规格:

    RTM441          50次 (250 μl)    

    ● 产品组成:

    货号

    名称

    规格

    RTM441-01

    20bp DNA ladder

    50次(250 μl

    DL070

    6×Native-PAGE DNA上样缓冲液

    1 ml

    DL020

    6×DualColor DNA loading buffer (双染料)

    1 ml

    ● 产品简介:

    本产品是由13条带状双链DNA条带组成的精准定量Marker,适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中DNA条带大小和含量的分析。13条带的大小分别为20,40,60,80,100,120,140,160,180,200,300,400,500 bp。其中100bp和200bp条带为加亮带,含量为100ng/5μl,其余条带浓度为50ng/5μl。

    本产品为双链DNA Marker,适用于非变性的PAGE电泳和琼脂糖凝胶电泳,不适用于尿素PAGE电泳。由于片段较小,如使用琼脂糖分离,建议使用高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离。

    按照每次上样5 μl计算,该产品可以使用50次。

    ● 储存条件:

      4 贮存6个月(-20℃长期贮存)。

    ● 使用方法:

    一、 TBE-PAGE凝胶分离:

    1、制备凝胶步骤:

    1.1参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。

    1.2按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合;最后加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

       注:20bp DNA ladder 适用于配制20%TBE-PAGE胶。

    1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇,使凝胶表面保持平整。

    1.4静置10-20分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合

    表一 TBE-PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml,适用于1mm厚度小板胶)

    各组份体积(ml

    最佳DNA分离范围

    凝胶浓度

    灭菌水

    30%PAA291

    5×TBE

    10%APS

    TEMED

    70-450 bp

    6%

    3

    1.0

    1.0

    0.05

    0.005

    60-460 bp

    8%

    2.66

    1.34

    1.0

    0.05

    0.005

    50-300 bp

    10%

    2.33

    1.67

    1.0

    0.05

    0.005

    40-200 bp

    12%

    2

    2.0

    1.0

    0.05

    0.005

    25-150 bp

    15%

    0.5

    2.5

    1.0

    0.05

    0.005

    5-100 bp

    20%

    0.66

    3.34

    1.0

    0.05

    0.005

    1.5去除覆盖在分离胶上的乙醇;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    表二 TBE-PAGE 4%浓缩配方表 (总体积1.5 ml,适用于1mm厚度小板胶)

    各组份体积(ml

    凝胶浓度

    灭菌水

    30%PAA291

    5×TBE

    10%APS

    TEMED

    4%

    1.0

    0.2

    0.3

    0.02

    0.002

    1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    1.7静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    2、电泳:

    2.1 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入1×TBE电泳液,1 ml吸头冲洗加样孔1-2次。

    2.2 取待测样品,加入相应体积6×Native PAGE DNA上样缓冲液,如5 μl样品加1 μl 上样缓冲液,短暂离心后取5-10 μl上样。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齿梳子上样5 μl,其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。

    2.3 连接电源线,打开电源开关。200V稳压电泳。至二甲苯菁指示前沿到达凝胶三分之二位置时结束电泳(此时溴酚蓝指示前沿已经跑出凝胶,不可见)。

    TBE-PAGE电泳

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    200 V

    20-25 mA/板胶

    10-15 mA/板胶

    70+min


    3、染色:

    3.1 漂洗:玻璃板上拆下凝胶后,适量蒸馏水漂洗3-5分钟。

    3.2 染色液配制:

      TBE-PAGE胶可以使用EBRealSafe类染料后染染色,以下程序用RealSafe Red核酸染料(货号:GR002)进行染色。即用型染色液配制:

     

    即用型RealSafe核酸染色液

     

    100 ml

    1×TBE

    100 ml

    RealSafe Red核酸染料

    20 μl

    3.3染色和观察:

      凝胶浸泡于即用型染色液中,常温避光摇床40-60 rpm染色30 分钟。紫外光下观察。

    二、 琼脂糖凝胶分离:

    1. 琼脂糖凝胶制备:

      由于片段较小,建议选用高分辨率琼脂糖(货号AR1036)制胶。

    以下步骤以制备50 ml 3%凝胶为例:

    称取1.5 g琼脂糖于玻璃三角瓶中,加入50 ml 1×TAE,5 μl RealSafe Red核酸染料或其他核酸染料(如EB,GoldView),混匀,盖好瓶盖,微波炉中火加热至沸腾,轻摇混匀,重复1-2次至琼脂糖完全溶解,无可见颗粒。倒入制胶容器中,插好梳子,常温凝固30-50分钟至凝胶完全凝固。

    2. 电泳:

    取待测样品,加入相应体积6×DualColor DNA loading buffer,如10 μl样品加2 μl 上样缓冲液,短暂离心后取5-10 μl上样。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齿梳子上样5 μl,其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。

    建议电泳条件:凝胶浓度为3%,电泳电压8-10 v/cm(单位电压指电泳槽阴阳极之间的距离电压,如阴极阳极之间的距离为20 cm,可以用160-200 V电压进行稳压电泳),待溴酚蓝指示前沿距离凝胶末端2 cm时终止电泳,电泳时间35-40分钟。

    注:3% 琼脂糖TAE电泳中,溴酚蓝大小约为20bp,二甲苯菁大小约200bp。

    3. 紫外灯下观察条带。

    注:使用EB或Goldview染料时,由于染料本身带正电荷较多,随着电泳时间的延长,染料会向阴极聚集,导致小片段核酸结合的染料含量降低,会出现小片段的DNA片段紫外灯下亮度变弱或不可见。此时可以将胶浸泡于含有染料的1×TAE缓冲液中染色15-20分钟即可看到小片段。

    4. 实验示例:



     



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