单链DNA Marker（25-75 nt）
● 产品编号及规格：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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运输
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RTM501
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单链DNA Marker（25-75 nt）
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125 μl
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-20℃
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湿冰
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DL080
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2×TBE尿素上样缓冲液
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1 ml
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4℃或-20℃
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湿冰
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● 产品简介：
单链DNA Marker由不同长度的单链DNA分子混合而成，7条带的大小为20，25，30，35，40，50，75nt。样品保存在 TE缓冲液中，35nt
浓度为0.8μg/μl，其余条带浓度为0.4
μg/μl。使用前与等体积2×TBE尿素上样缓冲液混合即可上样电泳。该Marker适用于跑尿素变性胶，电泳后使用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。
产品内附带2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080）。以每次上样5 μl计算，混合好的单链DNA Marker可以使用大约50次。
● 保存条件和运输：
-20℃贮存，有效期24个月；湿冰运输。
● 使用方法：
注：以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。
一. 凝胶制备：
1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒（Cat：RTE4102））或按照以下程序制胶。
表一 配制不同浓度凝胶所需各组分的体积(毫升) （8×10cm 1.0mm厚度）
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单链DNA长度
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最佳凝胶浓度
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尿素（克）
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40%PAA
（29:1）ml
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5×TBE
ml
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补水到总体积
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.94
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0.875
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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50-400 nt
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8%
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2.94
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1.4
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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30-300 nt
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10%
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2.94
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1.75
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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10-150 nt
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15%
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2.94
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2.625
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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加入10%APS和TEMD后，立即混匀，凝胶常温（25℃）静置30-40分钟。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二. 样品制备：
2.1
取适量体积单链DNA
Marker样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液（Cat：DL080）混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。
三.电泳：
3.1. 预电泳：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。
3.2.上样：根据梳齿确定Marker上样量， 一般是10齿1mm厚梳子上样5
μl，15齿1mm厚梳子上样3
μl
3.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200V
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15-20 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60+ min
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最佳电压，最优的分辨率
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3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
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变性胶浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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10 nt
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52 nt
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四．染色：
4.1.
用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（Cat：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（Cat：RTS5101）染色均可以得到清晰的条带分离效果。
注：如果使用核酸染料染色，RealSafe
Gold核酸染料结合单链核酸效果最佳，强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
● 注意事项：
1. 单链DNA Marker产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于非变性PAGE电泳或水平琼脂糖凝胶电泳。
● 电泳示例：
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