单链DNA Marker(25-75 nt)
● 产品编号及规格:
货号
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名称
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规格
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贮存
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运输
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RTM501
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单链DNA Marker(25-75 nt)
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125 μl
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-20℃
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湿冰
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DL080
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2×TBE尿素上样缓冲液
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1 ml
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4℃或-20℃
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湿冰
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● 产品简介:
单链DNA Marker由不同长度的单链DNA分子混合而成,7条带的大小为20,25,30,35,40,50,75nt。样品保存在 TE缓冲液中,35nt
浓度为0.8μg/μl,其余条带浓度为0.4
μg/μl。使用前与等体积2×TBE尿素上样缓冲液混合即可上样电泳。该Marker适用于跑尿素变性胶,电泳后使用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的条带分离效果。
产品内附带2×TBE尿素上样缓冲液(Cat:DL080)。以每次上样5 μl计算,混合好的单链DNA Marker可以使用大约50次。
● 保存条件和运输:
-20℃贮存,有效期24个月;湿冰运输。
● 使用方法:
注:以下使用方法均以8×10cm凝胶 厚1.0mm示例,其他规格凝胶请适当调整。
一. 凝胶制备:
1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒(Cat:RTE4102))或按照以下程序制胶。
表一 配制不同浓度凝胶所需各组分的体积(毫升) (8×10cm 1.0mm厚度)
单链DNA长度
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最佳凝胶浓度
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尿素(克)
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40%PAA
(29:1)ml
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5×TBE
ml
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补水到总体积
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10%APS
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TEMED
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200-1000 nt
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5%
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2.94
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0.875
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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50-400 nt
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8%
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2.94
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1.4
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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30-300 nt
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10%
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2.94
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1.75
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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10-150 nt
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15%
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2.94
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2.625
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1.4
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7 ml
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70 μl
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7 μl
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加入10%APS和TEMD后,立即混匀,凝胶常温(25℃)静置30-40分钟。
注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二. 样品制备:
2.1
取适量体积单链DNA
Marker样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液(Cat:DL080)混合,70℃处理5分钟,冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。
三.电泳:
3.1. 预电泳:电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后,用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素。
3.2.上样:根据梳齿确定Marker上样量, 一般是10齿1mm厚梳子上样5
μl,15齿1mm厚梳子上样3
μl
3.3. 连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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适用条件
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推荐电压
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200V
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15-20 mA/板胶
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10-15 mA/板胶
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60+ min
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最佳电压,最优的分辨率
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3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。
变性胶浓度
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溴酚蓝
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二甲苯菁
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5%
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35 nt
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130 nt
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8%
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19 nt
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75 nt
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10%
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15 nt
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55 nt
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15%
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10 nt
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52 nt
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四.染色:
4.1.
用单链DNA
PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的条带分离效果。
注:如果使用核酸染料染色,RealSafe
Gold核酸染料结合单链核酸效果最佳,强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed,Goldview,EB等染色效果不好。
● 注意事项:
1. 单链DNA Marker产品适用于变性PAGE垂直电泳,不适用于非变性PAGE电泳或水平琼脂糖凝胶电泳。
● 电泳示例:
