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RTM502 单链DNA 50nt Marker(50-1000nt)
 产品货号: RTM502
 产品名称: RTM502 单链DNA 50nt Marker(50-1000nt)
 产品价格/规格: 10次 1000元
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 更新时间: 2022-09-08
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  • 单链DNA 50nt Marker                                 

    ● 产品编号及规格:

    货号

    名称

    规格

    贮存

    运输

    RTM502

    单链DNA 50nt Marker

    50 μl

    -20℃

    湿冰

    DL080

    2×TBE尿素上样缓冲液

    1 ml

    4℃-20

    湿冰

    ● 产品简介:

    单链DNA 50nt Marker是以50个碱基为递增单位的单链DNA分子量标准,最短条带对应 50 nt,最长条带超过 1000 nt。样品保存在TE缓冲液中,单条DNA片段浓度约为 20 ng/μl。该Marker适用于跑变性PAGE胶,电泳后染色可以得到清晰的条带分离效果。

    产品内附带2×TBE尿素上样缓冲液(Cat:DL080)。以每次上样10 μl计算,混合好的单链DNA Marker可以使用大约10次。

    ●  保存条件和运输:

    -20℃贮存,有效期24个月;湿冰运输。

    ● 使用方法:

    注:单链DNA 50nt Marker使用8×10cm凝胶不能有效分离大于500 nt片段,如果关注高于 500nt的片段,请选用更大面积的凝胶进行电泳。

    以下使用方法均以8×10cm凝胶 1.0mm示例。

    . 凝胶制备:

    1.1 可以选择DNA尿素PAGE电泳试剂盒(Cat:RTE4102))或按照以下程序制胶:

    表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml,适用于厚度1.0 mm小板胶)

    单链DNA长度

    最佳凝胶浓度

    尿素(克)

    40%PAA

    29:1

    5×TBE

    补水到总体积

    10%APS

    TEMED

    200-1000 nt

    5%

    2.1

    0.625 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    50-400 nt

    8%

    2.1

    1 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    30-300 nt

    10%

    2.1

    1.25 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    10-150 nt

    15%

    2.1

    1.875 ml

    1 ml

    5 ml

    50 μl

    5 μl

    最后加入10%APS和TEMD后,立即混匀。

    1.2在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

    1.3静置10-20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    1.4去除覆盖在分离胶上的水层;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

    表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml,适用于1.0mm厚度胶)

    各组份体积(ml

    凝胶浓度

    尿素

    40%PAA29:1

    5×TBE

    灭菌水

    10%APS

    TEMED

    4%

    0.84

    0.2 ml

    0.4 ml

    补水至体积2 ml

    20 μl

    2 μl

    1.5将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    1.6静置30-60分钟,等待浓缩胶聚合。

    注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

    . 样品制备:

    2.1 取5-10 μl单链DNA Marker样品与等体积的2×TBE尿素上样缓冲液(Cat:DL080)混合,70℃处理5分钟,冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。

    .电泳:

    3.1. 预电泳(可选):电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后,1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次,去除残余的尿素

    3.2.上样:根据梳齿确定Marker上样量, 一般是10齿1mm厚梳子上样5 μl,15齿1mm厚梳子上样3 μl。

    3.3. 连接电源线,打开电源开关,按照以下条件电泳。

     

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    适用条件

    推荐电压

    200V

    15-20 mA/板胶

    10-15 mA/板胶

    60+ min

    最佳电压,最优的分辨率

    3.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。

    变性胶浓度

    溴酚蓝

    二甲苯菁

    5%

    35 nt

    130 nt

    8%

    19 nt

    75 nt

    10%

    15 nt

    55 nt

    15%

    10 nt

    52 nt

    四.染色:

    单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5103),核酸PAGE电泳染色试剂盒(Cat:RTS5102)或核酸快速银染试剂盒(Cat:RTS5101)染色均可以得到清晰的条带分离效果。

    注:如果使用核酸染料染色,RealSafe Red(货号:GR002)或RealSafe All(货号:GR004)核酸染料结合单链核酸效果最佳,强烈建议使用以便获得最佳效果的胶图。其余染料如GelRed,Goldview,EB等染色效果不好。

    ● 注意事项:

    1. 单链DNA Marker产品适用于变性PAGE垂直电泳,不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。

    2. 建议单链DNA Marker现用现配,因为混合有上样缓冲液的单链DNA稳定性不好。

    ● 电泳示例:

    1. 小板胶使用RealSafe Red核酸染料(货号:GR002)染色:



    凝胶面积:10×8 cm

    电泳条件:1×TBE 恒压150V  45min

                        染色:RealSafe Red染料后染,紫外激发拍照。


    2. 大板胶使用RealSafe Red核酸染料(货号:GR002)染色:



    凝胶面积:20×15 cm

    电泳条件:1×TBE 恒压150V  2.5 h

    染色:RealSafe Red染料后染,紫外激发拍照。



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