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RGA1040 Anti-GAPDH抗体 (兔多抗)
 产品货号: RGA1040
 产品名称: RGA1040 Anti-GAPDH抗体 (兔多抗)
 产品价格/规格: 20μl 500元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-08-29
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  • Anti-GAPDH抗体(兔多抗)

    Anti-GAPDH Antibody(Polyclonal Antibody from Rabbit)

    产品编号

    产品名称

    规格

    RGA1040

    Anti-GAPDH抗体(兔多抗)

    20 μl

    产品简介

    甘油醛-3- 磷酸脱氢酶( Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH) 是糖酵解(glycolysis)过程中的关键酶,分子量为37 kDa左右。它催化甘油醛-3-磷酸的氧化磷酸化反应。GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中一般是恒定、高水平表达的,常用作Western Blot实验的内参照。

    来源

    用途及稀释比例

    抗体类型

    GAPDH分子量

    Rabbit

    WB 1:2000-5000

    IHC 1:200-1000

    IF 1:200-1000

    多克隆抗体

    36-38 kD

    注:WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence

    本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测20次。

    贮存形式:

    稳定溶液,1 mg/ml 抗体溶于PBS,50%甘油,pH7.2。

    保存及运输条件:

    -20℃保存,一年有效;避免反复冻融;湿冰运输。

    使用说明:

    1. Western Blot杂交(ECL显色):1:2000-5000稀释,常温孵育1-2 h或4℃过夜。

    2. 免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC):1:200-1000稀释。

     实验示例:

     Jurkat总蛋白,细胞浆蛋白,细胞核蛋白GAPDH检测

    总蛋白提取:4×106 Jurkat细胞,2000 g 离心收集,去上清,沉淀中加入200 μl RIPA(加2 μl 100 mM PMSF),冰上裂解5分钟,4℃ 16000 g 15 分钟,上清即为总蛋白(TP)。

    细胞浆蛋白:4×106 Jurkat细胞,2000 g 离心收集,加入400 μl细胞浆蛋白抽提试剂A(加4 μl 100mM PMSF,加0.4 μl 1 M DTT),悬浮沉淀,冰浴15分钟;加入20 μl细胞浆蛋白抽提试剂B,混匀,冰上孵育1分钟,震荡5秒,4℃ 16000g 10分钟,小心收集上清即为细胞浆蛋白(C-Pr),不要触及沉淀。

    细胞核蛋白提取:沉淀用200 μl 1×PBS漂洗一次,4℃ 16000 g 2分钟;沉淀中加入200 μl 细胞核蛋白抽提试剂(加2 μl 100mM PMSF,加0.2 μl 1 M DTT),重悬沉淀,剧烈震荡15秒,冰浴40分钟,每间隔10分钟剧烈震荡15秒;4℃ 16000 g 5分钟,上清即为细胞核蛋白(N-Pr)。

    电泳:RTD6132-15%3.3C  200V 33-12 mA 55 min

    转膜:NC膜,1×RealBlot快速转膜液湿转,稳流400 mA,电压变化64-57 V,转膜时间35 min

    封闭:无蛋白快速封闭液RT 20 min

    一抗孵育:GAPDH 羊抗兔多抗,一抗稀释液稀释1:2000

    二抗孵育:羊抗兔IgG-HRP,二抗稀释液稀释1:5000

    检测:ECL发光检测



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