核酸快速银染试剂盒
产品编号
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规格
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贮存
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RTS5101
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25次
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常温
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● 储存条件
常温保存,开封后一年有效。
● 产品简介
核酸快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit for Nucleic
Acids)是一种快速简单、可用于聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。其检测原理是: 银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,随后 Ag+在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒,后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比 EB 高达 200 倍,能检测到10ng的 DNA条带,常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等。
本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。
说明书后附有实验记录表格,方便记录实验步骤。
● 产品组成:
产品编号
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产品名称
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规格
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贮存
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RTS5101-1
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试剂A-核酸银染染色增敏液(10×)
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250 ml
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常温;
浓缩液,用前按照标签加入无水乙醇
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RTS5101-2
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试剂B-核酸银染染色加速液(10×)
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250 ml
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常温
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RTS5101-3
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试剂C-核酸银染银溶液(100×)
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26 ml
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常温,避光
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RTS5101-4
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试剂D-核酸银染基本显色液(10×)
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250 ml
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常温
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RTS5101-5
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试剂E-核酸银染显色加速液(500×)
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5 ml
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常温,避光
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● 注意事项:
1. 由于银染非常灵敏,操作时请注意尽量使用高纯度的水,并确保所使用的器皿非常清洁,最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套,避免皮肤和凝胶直接接触。
2. 需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。
3. 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶,各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大,对于更厚的凝胶,作用时间需按照厚度的比例适当延长。
4. 本说明书所指的常温温度为20-25℃,操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降,各步骤需适当延长时间。
5. 银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀,可在30-37℃水浴中溶解,并充分混匀后使用。
● 使用方法:
一. 漂洗步骤:
电泳结束后,凝胶中加入100ml MilliQ级纯水,在摇床上常温摇动2分钟,摇动速度为60-70rpm;
重复此步骤1次。
二. 银染步骤:
1. 银染:
弃水,加入100ml即用型染色液,在摇床上常温摇动5分钟,摇动速度为60-70rpm。
即用型染色液配制量 100 ml
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超纯水
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79
ml
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试剂A-核酸银染染色增敏液(10×)
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10
ml
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试剂B-核酸银染染色加速液(10×)
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10
ml
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试剂C-核酸银染银溶液(100×)
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1
ml
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注:即用型染色液配制后需在20分钟内使用。
2. 水洗涤:
弃原有溶液,加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动15-20秒,摇动速度为60-70rpm。
注意:水洗涤的时间不能超过20秒。
三. 显色步骤:
弃水,加入100ml银染显色液,在摇床上室温摇动3-10分钟,直至出现比较理想的预期核酸条带,摇动速度为60-70rpm。
银染显色液配制量 100 ml
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超纯水
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89.8
ml
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试剂D-核酸银染基本显色液(10×)
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10
ml
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试剂E-核酸银染显色加速液(500×)
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0.2
ml
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注:银染显色加速液(500X)有刺激性气味,建议在通风橱内操作;
银染显色液配制后需在20分钟内使用。
四. 终止步骤:
弃银染显色液,加入100ml
MilliQ级纯水,在摇床上常温摇动3-5分钟,摇动速度为60-70rpm。
五. 保存:
可在MilliQ级纯水中保存;或采用适当的方式制备成干胶。
● 常见问题:
1.
背景太深:
a. 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束,显色反应时间过长会导致背景很深。
b. 水的纯度太低。需使用大于16
MΩ·cm的高纯度水。
2. 核酸条带非常浅:
a. 银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间,水洗涤的时间不能超过20秒,否则会导致过多的银离子被洗去,导致检测灵敏度下降。
b. 核酸银染显色加速液(500×)失效。核酸银染显色加速液(500×)不能低温保存,低温保存会导致加速液失效。
3. 凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹:
a. 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器,并加入足量的各种溶液,同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
b. 用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤,随后用自来水充分冲洗,最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染,并注意避免各种可能的污染。
c. 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作,切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
d. 有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。
核酸银染实验记录表格
实验日期:
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约25-30分钟
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标记√
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起始时间
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一 漂洗步骤
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水漂洗
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2×2 min
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二 银染步骤
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银染
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5 min
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水漂洗
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<1 min
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三 显色步骤
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显色
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3-10 min
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四 终止步骤
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水漂洗
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5 min
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五 保存
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实验示例