核酸快速银染试剂盒

● 储存条件

常温保存，开封后一年有效。

● 产品简介

核酸快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit for Nucleic Acids)是一种快速简单、可用于聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。其检测原理是： 银离子(Ag⁺）可与核酸形成稳定的复合物，随后 Ag⁺在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒，后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比 EB 高达 200 倍，能检测到10ng的 DNA条带，常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等。

本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。

说明书后附有实验记录表格，方便记录实验步骤。

● 产品组成：

● 注意事项：

1. 由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。

2. 需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。

3. 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。

4. 本说明书所指的常温温度为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。

5. 银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀，可在30-37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。

● 使用方法：

一. 漂洗步骤：

电泳结束后，凝胶中加入100ml MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm；

重复此步骤1次。

二. 银染步骤：

1. 银染：

弃水，加入100ml即用型染色液，在摇床上常温摇动5分钟，摇动速度为60-70rpm。

注：即用型染色液配制后需在20分钟内使用。

2. 水洗涤：

弃原有溶液，加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动15-20秒，摇动速度为60-70rpm。

注意：水洗涤的时间不能超过20秒。

三. 显色步骤：

弃水，加入100ml银染显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，直至出现比较理想的预期核酸条带，摇动速度为60-70rpm。

注：银染显色加速液(500X)有刺激性气味，建议在通风橱内操作；

银染显色液配制后需在20分钟内使用。

四.  终止步骤：

弃银染显色液，加入100ml MilliQ级纯水，在摇床上常温摇动3-5分钟，摇动速度为60-70rpm。

五. 保存：

可在MilliQ级纯水中保存；或采用适当的方式制备成干胶。

● 常见问题：

1.  背景太深：

a. 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。

b. 水的纯度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。

2.  核酸条带非常浅：

a. 银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过20秒，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。

b. 核酸银染显色加速液（500×）失效。核酸银染显色加速液（500×）不能低温保存，低温保存会导致加速液失效。

3.  凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹：

a. 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。

b. 用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染，并注意避免各种可能的污染。

c. 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。

d.  有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。

核酸银染实验记录表格

实验日期：

实验示例

1 A novel label-free fluorescence aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III- and SYBR Green I- aided amplification strategy. Yanxian Wang, Kai Kang, Sui Wang,Weijun Kang, Cheng Cheng, Ling Mei Niu，Zhiyong Guo. Sensors and Actuators B: Chemical Available online 01 November 2019 https://doi.org/10.1016/j.snb.2019.127348

2 A robust photoluminescence screening assay identifies uracil-DNA glycosylase inhibitors against prostate cancer. Guodong Li，Chung-Hang Leung. Chem. Sci.,2020, 11,1750–1760  DOI: 10.1039/c9sc05623h

3 A novel resonance Rayleigh scattering aptasensor for dopamine detection based on an Exonuclease III assisted signal amplification by G - quadruplex nanowires formation. Yanxian Wang，Yongzhi Guo Arabian Journal of Chemistry  (2020) 13, 6598–6605