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核酸快速银染试剂盒
 产品货号: RTS5101
 产品名称: 核酸快速银染试剂盒
 产品价格/规格: 25次 450元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2019-10-18
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  • 核酸快速银染试剂盒

    产品编号

    规格

    贮存

    RTS5101

    25

    常温

    储存条件

    常温保存,开封后一年有效。

    产品简介

    核酸快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit for Nucleic Acids)是一种快速简单、可用于聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。其检测原理是: 银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,随后 Ag+在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒,后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比 EB 高达 200 倍,能检测到10ng的 DNA条带,常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等。

    本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。

    说明书后附有实验记录表格,方便记录实验步骤。

    产品组成:

    产品编号

    产品名称

    规格

    贮存

    RTS5101-1

    试剂A-核酸银染染色增敏液(10×)

    250 ml

    常温;

    浓缩液,用前按照标签加入无水乙醇

    RTS5101-2

    试剂B-核酸银染染色加速液(10×)

    250 ml

    常温

    RTS5101-3

    试剂C-核酸银染银溶液(100×)

    26 ml

    常温,避光

    RTS5101-4

    试剂D-核酸银染基本显色液(10×)

    250 ml

    常温

    RTS5101-5

    试剂E-核酸银染显色加速液(500×)

    5 ml

    常温,避光

    ● 注意事项:

    1. 由于银染非常灵敏,操作时请注意尽量使用高纯度的水,并确保所使用的器皿非常清洁,最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套,避免皮肤和凝胶直接接触。

    2. 需自备无水乙醇及MilliQ级纯水。

    3. 下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。对于更大的凝胶,各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大,对于更厚的凝胶,作用时间需按照厚度的比例适当延长。

    4. 本说明书所指的常温温度为20-25,操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降,各步骤需适当延长时间。

    5. 银染基本显色液(10×)在低温环境下可能会出现沉淀,可在30-37水浴中溶解,并充分混匀后使用。

     

    使用方法:

    . 漂洗步骤:

    电泳结束后,凝胶中加入100ml MilliQ级纯水,在摇床上常温摇动2分钟,摇动速度为60-70rpm;

    重复此步骤1

    . 银染步骤:

    1. 银染:

    弃水,加入100ml即用型染色液,在摇床上常温摇动5分钟,摇动速度为60-70rpm。

    即用型染色液配制量  100 ml

    超纯水

    79 ml

    试剂A-核酸银染染色增敏液(10×)

    10 ml

    试剂B-核酸银染染色加速液(10×)

    10 ml

    试剂C-核酸银染银溶液(100×)

    1 ml

    注:即用型染色液配制后需在20分钟内使用。

    2. 水洗涤:

    弃原有溶液,加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水,在摇床上室温摇动15-20秒,摇动速度为60-70rpm。

    注意:水洗涤的时间不能超过20

    . 显色步骤:

    弃水,加入100ml银染显色液,在摇床上室温摇动3-10分钟,直至出现比较理想的预期核酸条带,摇动速度为60-70rpm。

    银染显色液配制量                 100 ml

    超纯水

    89.8 ml

    试剂D-核酸银染基本显色液(10×)

    10 ml

    试剂E-核酸银染显色加速液(500×)

    0.2 ml

    注:银染显色加速液(500X)有刺激性气味,建议在通风橱内操作;

    银染显色液配制后需在20分钟内使用。

    终止步骤:

    弃银染显色液,加入100ml MilliQ级纯水,在摇床上常温摇动3-5分钟,摇动速度为60-70rpm。

    . 保存:

    可在MilliQ级纯水中保存;或采用适当的方式制备成干胶。

    常见问题:

    1.  背景太深:

    a. 显色时间过长。通常显色反应会在10分钟内结束,显色反应时间过长会导致背景很深。

    b. 水的纯度太低。需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。

    2.  核酸条带非常浅:

    a. 银染后水洗涤时间过长。在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间,水洗涤的时间不能超过20秒,否则会导致过多的银离子被洗去,导致检测灵敏度下降。

    b. 核酸银染显色加速液(500×)失效。核酸银染显色加速液(500×)不能低温保存,低温保存会导致加速液失效。

    3.  凝胶上出现小点或其它非核酸的痕迹:

    a. 凝胶没有充分被溶液浸没。请注意选择大小合适的容器,并加入足量的各种溶液,同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。

    b. 用于银染的容器没有充分洗涤干净。容器需先用洗涤剂充分洗涤,随后用自来水充分冲洗,最后用高纯度水再洗涤数次。该容器最好能专用于银染,并注意避免各种可能的污染。

    c. 指纹或其它压痕。请注意戴手套操作,切勿直接接触皮肤。操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。

    d.  有金属物质接触凝胶。金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。

     

    核酸银染实验记录表格

    实验日期:

     

     

    25-30分钟

    标记√

    起始时间

    漂洗步骤

    水漂洗

    2×2 min

     

     

    银染步骤

     

     

     

     

     

    银染

    5 min

     

     

     

    水漂洗

    1 min

     

     

    显色步骤

    显色

    3-10 min

     

     

    终止步骤

    水漂洗

    5 min

     

     

    保存

     

     

     

     

     




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