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RTB3101 2×GC buffer
 产品货号: RTB3101
 产品名称: RTB3101 2×GC buffer
 产品价格/规格: 1ml 50元/5×1ml 200元/10×1ml 300元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-09-02
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  • 2×GC Buffer

         产品组成:

    目录号

    规格

    价格

    RTB3101-01

    1ml

    50

    RTB3101-02

    5×1ml

    200

    RTB3101-03

    10×1ml

    300

    保存:-20

    用途:

    PCR 扩增复杂结构的 DNA 片段。

    产品说明和注意事项:

    1. 本产品能与各种PCR酶配合使用,能够扩增具有复杂二级结构模板(GC rich、重复序列等)的PCR片段。

    2. 使用 GC Buffer 进行 PCR 扩增时,建议使用 Tm 值较高的引物。因此,引物最好设计在 30 mer 左右。

    3. 使用 GC Buffer扩增的 GC rich DNA 片段长度,会因 GC 含量不同而各有差异。

    4. 由于 GC Buffer 和一般的PCR Buffer 相比 DNA 变性效果较强,因此,一般的 DNA片段(GC含量低于50%的目的片段)不推荐使用2×GC buffer进行扩增

    使用说明:

    1. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

     

    成分

    25μl反应体系

    50μl反应体系

    终浓度

    Template

    0.05-0.5 μg

    0.1-1 μg

    as you wish

    Primer 110 μM

    0.5 μl

    1 μl

    200nM

    Primer 210 μM

    0.5 μl

    1 μl

    200nM

    2×GC buffer

    12.5 μl

    25 μl

    dNTP Mixture(10 mM)

    0.5 μl

    1 μl

    200μM each

    Taq (5 U/μl)

    0.25-0.5 μl

    0.5-1 μl

    2.5-5U

    ddH2O

    up to 25 μl

    up to 50 μl

    -

    2. 混匀后,离心快甩将反应液收集到管底。

    3. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。

    4. PCR仪上执行以下程序:

    两步法:

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    初始变性

    94

    5 min

    1

    变性

    94

    30 sec

    25-40*

    退火和延伸

    68

    1 min/kb

    最后延伸

    72

    5 min

    1

    *注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。


    1. 怎样确定扩增片段的GC含量大小?

       推荐使用Oligo软件分析片段的GC含量(如下图所示)

     

    2. 2×GC buffer能扩增正常GC含量片段吗?

    2×GC buffer可以扩增GC含量正常的模板。然而,由于GC buffer有比较强的变性效果,因此一般的模板使用GC buffer扩增时,有时会降低扩增效率。

    3. 2×GC buffer能兼容大多数PCR用酶吗?

    2×GC buffer能兼容大多数PCR酶,比如TaqTaq plusLong Taq等,可以根据片段长度以及保真性要求选择不同的酶。

    4. 使用GC buffer扩增时,为什么推荐使用两步法?

    由于目的片段GC含量高,引物的Tm值往往会比较高,在PCR时,当退火温度和延伸温度差距较小时,比如退火温度超过60时,退火温度和延伸温度可以设成同一数值,一般为68




    2×GC buffer
    lane 1-5: Rice 390bp fragement(GC% 77.1%)
    lane 6-10: Rice 760bp fragement(GC% 72.9%)
    lane 1 and 6: TaKaRa 2×GC buffer I
    lane 2 and 7: TaKaRa 2×GC buffer II
    lane 3 and 8: RTB3101 2×GC buffer
    lane 4 and 9: RTB3106 10×Taq PCR buffer
    lane 5: Rice 390bp,RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增
    lane 10: Rice 760bp,RTB3101 2×GC buffer, 三步法扩增




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