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·PCR
 
 
 





2×pfu PCR MasterMix
 产品货号: RTH3013/3104
 产品名称: 2×pfu PCR MasterMix
 产品价格/规格: 500μl/5×500μl
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2018-02-02
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    2×pfu PCR MasterMix

    产品包装:

     

     

    目录号

    包装

    价格

    2×pfu PCR MasterMix(不含染料)

    RTH3103-02

    500μl

    100

    RTH3103-03

    5×500μl

    400

    2×pfu PCR MasterMix(含染料)

    RTH3104-02

    500μl

    100

    RTH3104-03

    5×500μl

    400

    注:以50μl PCR反应体系为例,每次使用25μl 2×MasterMix500μl可做20 50μl PCR反应。

    储存条件: -20℃可长期保存;4稳定贮存3个月。经常使用时,一旦融化后请4贮存,尽量避免反复冻融。

    产品简介:

    本产品包含pfu DNA聚合酶、dNTPsMg2+、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂,浓度为2×。使用时,只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应,可最大限度的减少人为误差,具有快速简便、稳定性好等优点。用于高保真的DNA片段的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物为平滑末端,不可以直接用于TA克隆,要通过平滑末端克隆法进行克隆。

    质量控制:

    以λ DNA为模板,可以很好扩增5kbDNA片段;以水稻基因组为模板,可以很好扩增3.2kbDNA片段。

         使用说明:

    1. 冰浴中彻底融化2×MasterMix,混匀后Minispin将溶液收集到管底。

    2. 按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

     

    50μl反应体系

    终浓度

    2×MasterMix

    25μl

    上游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    下游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    模板

    × μl

    10pg-1μg

    补至50μl

     

    3. 快甩离心将反应液收集到管底。

    4. PCR仪如果没有热盖加热的话,补加25μl矿物油。

    5. PCR仪上执行以下程序:

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    初始变性

    94

    5 min

    1

    变性

    94

    30 sec

    25-40*

    退火

    Tm-5*

    30 sec

    延伸

    72

    0.5kb/min

    最后延伸

    72

    5 min

    1

    *注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

    6. 电泳检测。

     注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上样;不含染料的2×MasterMix要与6×loading buffer混合后上样。


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