免费咨询电话: 400-699-0631      点击这里给我发消息
 
 
 
产品分类
 
·PCR
 
 
 





RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
 产品货号: RTR2103
 产品名称: RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit
 产品价格/规格: 50次 800元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2019-10-18
详细信息   访问次数:

  • 产品介绍
  • 发表文章
  • 相关产品
  • RTScript All-in-One 1st-Strand cDNA Synthesis Kit

    ●    产品货号及规格:

    货号

    包装

    贮存

    RTR2103-01

    50×20μl

    -20

    ●    产品简介:

    本试剂盒含有反转录需要的全部试剂(RTScript MMLv Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,dNTP、反应 Buffer,Oligo (dT)18,Random primer),浓度为2×。进行RNA反转录反应时,只需加入模板和RNase Free H2O 即可高效合成第一链cDNA,大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。本制品含有去基因组成分gDNA Remover,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。具有快速简便、重复性高、特异性好、灵敏度高和稳定性好的特点。该试剂盒采用的反转录酶去除了 RNase H活性,从而避免反转录过程中降解RNA。 同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强,可耐受50℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应,采用高温反转录可显著打开 RNA二级结构,从而提高复杂 RNA 模板的扩增性能、提高反转录 cDNA的长度和产量,从而提高后续检测的灵敏度。合成的第一链 cDNA可广泛用于 2nd Strand 的合成、 杂交、 PCR扩增、Real-Time PCR 反应等。

    ●    贮存:

     -20℃贮存两年。

    ●    试剂盒组成:

    名称

    数量

    2×RTScript 1stStrandcDNA Synthesis MasterMix

    500 μl

    RNase-free H2O

    1 ml

    gDNA Remover

    50 μl

    ●    使用方法:

    . 第一链cDNA合成:

    1:去除gDNA污染:

    组份

    加入体积

    Total RNA/mRNA

    100ng-2μg(9 μl)

    gDNA Remover

    1μl

    RNase-free H2O

    up to 10 μl

    42处理 10min,冰上放置。

    2. 反转录反应:

    组份

    加入体积

    步骤1中的反应液

    10 μl

    2×RTScript 1stStrandcDNA Synthesis MasterMix

    10μl

    轻轻混匀,离心。

    若 cDNA后续用于 qPCR,逆转录时间:50℃孵育15min,

    若 cDNA后续用于普通 PCR,逆转录时间:50℃孵育30min。

    3. 终止反应:

    75℃孵育 5min,终止反应。 反应产物可直接用于 PCR,如果不立即使用,-20°C保存,长时间保存建议-70°C放置。

    . 第二链cDNA合成:

    合成的第一链cDNA可直接用于PCR。 常用反应体系(50 μl):

    按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

     

    50μl反应体系

    终浓度

    2×Taq PCR MasterMix

    25μl

    上游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    下游引物 10μM

    1-5μl

    0.2-0.8 μM

    模板

    × μl

    10pg-1μg

    补至50μl

     

    PCR仪上执行以下程序:

    步骤

    温度

    时间

    循环数

    初始变性

    94℃

    5 min

    1

    变性

    94℃

    30 sec

    25-40*

    退火

    Tm-5℃*

    30 sec

    延伸

    72℃

    1 min/kb

    最后延伸

    72℃

    5 min

    1

    *注: PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况,设定最佳的反应条件(温度、时间等)。


TOP】【打印本页】【关闭窗口



中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版权所有 京ICP备12052607 网站管理   快递查询   IF查询
电话:010-58437227 免费电话:400-699-0631 传真:010-57909566
点击这里给我发消息   内勤订货QQ:2446698252   技术支持QQ:460449375 电子邮箱:real-times@vip.163.com
注意:公司所有产品仅供科研使用
_×
在线咨询