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10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液
 产品货号: AP5015
 产品名称: 10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液
 产品价格/规格: 1升 150元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2019-10-18
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    产品编号

    产品名称

    规格

    AP5015

    10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液(粉末)

    1

    简介:

    10×酸性蛋白Native PAGE转膜缓冲液适用于酸性蛋白电泳后凝胶上非变性酸性蛋白的转膜。本转膜液配制便捷,稀释后无需调节pH值。缓冲液中不含任何变性剂,保证了转膜中维持蛋白的活性状态。该缓冲液最终可配成10升即用型1×缓冲液。

    保存条件:

    常温保存,两年有效。

    配制方法:

    10×转膜缓冲液粉末全部溶解于1升超纯水中,彻底溶解,即配成10×转膜缓冲液。根据下表配制成1×即用型转膜缓冲液

     

    1×即用型转膜缓冲液

     

    500 ml

    1 L

    10×转膜缓冲液

    50 ml

    100 ml

    超纯水

    450 ml

    900 ml

     

    不用调节pH

    使用方法:

    1. 酸性蛋白非变性电泳:

    各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同,因而有各自的等电点。凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质称为碱性蛋白,等电点偏碱性,pI>7,如组蛋白、精蛋白等。反之,凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质,等电点就偏酸性,pI<7,自然界中大多数蛋白都是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候,要利用低 pH 凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高 pH 凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的 pH 是 8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会相阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。酸性蛋白电泳可参考使用非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒(货号:RTD6130)。

    2. 转膜:

    转膜方法:酸性蛋白在非变性状态的转膜建议用湿转法。

      三明治结构:由于酸性蛋白pI<7 在碱性转膜缓冲液中带负电荷,转膜三明治结构与传统转膜相同,即根据“黑胶白膜”制作三明治,即膜置于转膜夹芯正极一侧,凝胶置于转膜夹芯负极一侧,这样凝胶上带负电荷的酸性蛋白才能转移到膜上。

    酸性蛋白转膜三明治制作:

    负极(电转夹黑色面)-海绵垫-35层滤纸-凝胶--35层滤纸-海绵垫-正极(电转夹白色面)

      膜的选择:膜可以用PVDF膜或NC膜,根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来,大于20kD蛋白选择0.45μm孔径,低于20kD选择0.22μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化,NC膜只需用转膜缓冲液润湿就可以。

      转膜条件:

    由于在非变性条件下,不同酸性蛋白的空间结构,聚合状态,电荷数量都有不同,以下转膜条件仅供参考,客户针对自己的目的蛋白,最好经过1-2次预实验后,确定最佳的转膜条件。

    蛋白大小

    稳流

    建议时间

    降温措施

    低于70kD

    180 mA

    2 小时

    需要

    高于70kD

    300 mA

    1.5 小时

    需要



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