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AH1050 细胞凋亡-Hoechst 染色试剂盒
 产品货号: AH1050
 产品名称: AH1050 细胞凋亡-Hoechst 染色试剂盒
 产品价格/规格: 100次 400元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2022-08-29
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  • 细胞凋亡-Hoechst 染色试剂盒

     

    货号

    名称

    规格

    AH1050

    细胞凋亡-Hoechst 染色试剂盒

    100

    ●  产品组成:

    组分货号

    名称

    规格

    贮存

    AH1050-01

    Hoechst33258染色液

    50 ml

    4

    AH1050-02

    固定液

    50 ml

    4

    AH1050-03

    抗荧光淬灭封片液

    1 ml

    4

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品简介:

    Hoechst 33258也称bisBenzimide H 33258HOE 33258,分子式为C25H24N6O·3HCl,分子量为533.88CAS Number 23491-45-4。该染料是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的毒性较低,常用于细胞凋亡检测,染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33258也用于普通的细胞核染色、DNA染色。

    Hoechst 33258的最大激发波长为346nm,最大发射波长为460nm,与双链DNA结合后,最大激发波长为352nm, 最大发射波长为461nm

    Hoechst染色试剂盒(Hoechst Staining Kit)为您提供了一种经典而又快速简便的细胞凋亡检测方法。细胞发生凋亡时,染色质会固缩。所以Hoechst 33258染色后,在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白。

    按照每次使用0.5 ml染色液计算,该试剂盒可以使用100次。

    ● 贮存:

    4℃避光保存,一年有效。

    ● 操作步骤:

    . 铁壁细胞:

    1.1 取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用无菌的PBS洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,生长至50%-80%满度。

    1.2刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5 ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    1.3去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    1.4加入0.5 ml Hoechst 33258染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    1.5去尽染色液,用PBS洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动晃动。

    1.6滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。

    1.7 荧光显微镜使用紫外激发,可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    .悬浮细胞:

    2.1 500 g(2400 rpm,下同)离心收集凋亡处理后细胞样品于1.5 ml离心管内,加入0.5 ml固定液,缓缓悬起细胞,常温固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

    2.2离心去尽固定液,用PBS洗两遍,每次3分钟,洗涤期间手动晃动数次。

    2.3 细胞沉淀中加入0.5 ml Hoechst 33258染色液,37℃避光染色10-15分钟,手动晃动数次。

    2.4 离心收集沉淀,重悬于100 μl PBS中。

    2.5 取5 μl抗荧光淬灭封片液于载玻片上,加入等体积步骤2.4染色后细胞重悬液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

    2.6 荧光显微镜下紫外激发,可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350 nm左右,发射波长460 nm左右。

    注:荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

    实验示例


    操作流程:使用不同浓度星饱菌素(Staurosporine,STS)凋亡处理Jurkat细胞。调整细胞密度为1×106/ml,每孔2 ml接种于六孔板中;加入终浓度为0,0.1,0.5,1,2,4 μM STS,37℃ 5%CO2培养3小时;500 g 3 min收集细胞;细胞沉淀中加入1 ml固定液,常温固定10 min;1×PBS漂洗两次;细胞沉淀中加入0.5 ml Hoechst 33258染色液,37℃避光染色10 min;离心后细胞沉淀重悬于100 μl 1×PBS中;取5 μl细胞悬液滴于载玻片上,加5 μl 抗荧光淬灭剂,封片观察。

    凋亡细胞由于染色质固缩,细胞核呈致密浓染或碎块状致密浓染。细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学变化分三期:I期的细胞核呈波纹状(rippled)或呈折缝样(creased)(0.1 μM STS处理),部分染色质出现浓缩状态(0.5 μM STS处理)。IIa期细胞核的染色质高度凝聚,边缘化;IIb期的细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体(1 μM STS处理)。



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