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Cell Counting Kit-8(CCK-8)
 产品货号: CK0115
 产品名称: Cell Counting Kit-8(CCK-8)
 产品价格/规格: 100次/500次 100元/450元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2018-08-27
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  • 细胞增殖-毒性检测试剂盒

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    产品组成:

    组分货号

    名称

    规格

    贮存

    CK0115-01

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    1 ml100次)

    4,避光保存

    CK0115-02

    Cell Counting Kit-8(CCK-8)

    5×1 ml500次)

    4,避光保存

    ●     产品简介:

    CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 WST-8是一种类似于 MTT的化合物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

    WST-8与传统的MTT,XTT,MTS,WST-1相比有明显的优点。首先,反应生成的formazan是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8更加稳定,检测线性范围更宽,灵敏度更高。

    本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

    本试剂盒检测便捷,使用方便。仅含一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解甲臜。特别适用于大批量样品的检测。

    另外,酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

    WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。

    本试剂盒可以测定100个或500个样品。

    ●     保存条件:

    CCK-8 溶液在避光,0-5的条件下可以保存一年,如长期保存,可在-20下保存 2 年,如需经常使用请将试剂存放在 0-5,为防止背景值增加干扰实验结果,请勿反复冻融。

    操作步骤:

    1.  在 96孔板中接种细胞悬液(100 μl /孔),通常细胞增殖实验每孔约2000 个细胞,细胞毒

    性实验每孔约5000 个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

    2.  按照实验需要,进行培养并给予0-10 μl特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如: 6,12,

    24或48小时)。

    3.  每孔加入10 μl CCK-8 溶液。如果起始的培养体积为200 μl,则需加入20 μl CCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和 CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

    4.  在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、

    2和4 小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

    5.  用酶标仪测定在450 nm处的吸光值,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm 的滤光

    片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于 600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。

    6.  如果需要暂时不测定 OD值,可以向每孔中加入10 μl0.1MHCl 溶液或者1%(w/v)的 SDS溶液,避光保存在室温,24 小时内吸光度不会发生变化。  

    注意事项:

    1.  使用96 孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96 孔板外围一圈加培养基、水或 PBS保湿。同时,可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。

    2.  培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前,建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8 试剂后的培养时间。

    3.  铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次,使培养基和CCK-8 溶液充分混匀。

    4.  本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8  之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

    5.  加入CCK-8 时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或 pH值已变化,建议换用新鲜的培养基。

    6.  用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。

    7.  本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。


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