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凝血酶 Thrombin
 产品货号: RT1040
 产品名称: 凝血酶 Thrombin
 产品价格/规格: 1000U 400元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2018-08-27
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  •  限制级凝血酶

    Thrombin, Restriction Grade

    产品包装:

    产品编号

    产品名称

    产品包装

    贮存

    RT1040-01

    限制级凝血酶

    1000 U

    -20

    RT1040-02

    1×Thrombin Dilution/Storage buffer

    2 ml

    -20

    RT1040-03

    10×Thrombin Cleavage buffer

    1 ml

    -20

     

    说明书

    一份

     

    产品简介:

    凝血酶(Thrombin)来源于牛血浆,分子量37KD,是由两条肽链(31KD6KD)通过二硫键组成的。凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶,通常能够有效切割质量比为1:2000的蛋白。凝血酶最佳切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2'X4 X3 是疏水氨基酸而X1' X2'是非酸性氨基酸),一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善酶切,通过这一"甘氨酸连接肽"只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。

    单位定义:1 U在标准切割缓冲液里20 16小时能切割1mg的目的蛋白。

    保存条件:

    -20℃保存,一年有效。

    使用方法:

    1 用0.1ml 1×凝血酶稀释/贮存缓冲液(1×Thrombin Dilution/Storage buffer)(50 mMsodium citrate,200 mMNaCl, 0.1% PEG-8000, 50% glycerol, pH 6.5)彻底溶解1000 U凝血酶粉末,得到凝血酶母液,浓度为10U/μl。

    2 用1×凝血酶稀释/贮存缓冲液将凝血酶母液按照1:25,1:50,1:100,1:200进行梯度稀释,稀释液含有大约每μl 0.4U,0.2U,0.1U,0.05U凝血酶。

    3 按照下表配制反应液;

    10×Thrombin Cleavage Buffer

    5 μl

    目的蛋白

    10 μg

    凝血酶稀释液(含有不同U的凝血酶)

    1 μl

    超纯水

    x μl

    总体积

    50 μl

    4 常温(20-25℃)孵育,2小时,4小时,6小时,8小时分别取样10μl与5×SDS-PAGE上样缓冲液混合后电泳检测,确定酶切程度。


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