免费咨询电话: 400-699-0631      点击这里给我发消息
 
 
 
产品分类
 
·PCR
 
 
 





RTG2406 全血基因组DNA小量提取试剂盒
 产品货号: RTG2406
 产品名称: RTG2406 全血基因组DNA小量提取试剂盒
 产品价格/规格: 50次 700元
 产品说明书: 暂无
 更新时间: 2020-10-22
详细信息   访问次数:

  • 产品介绍
  • 发表文章
  • 相关产品


  • 全血基因组DNA小量提取试剂盒

    Total DLood DNA Miniprep Kit

    试剂盒内容及保存:

    试剂盒组成

    RTG2406

    50次)

    贮存方式

    缓冲液DL1

    16 ml

    常温

    缓冲液DL2

    16 ml

    常温

    去蛋白液GD(浓缩液)

    30 ml

    常温

    漂洗液PW(浓缩液)

    25 ml

    常温

    洗脱缓冲液EB

    15 ml

    常温

    吸附柱CG

    50

    常温

    收集管(2 ml

    50

    常温

    说明书

    1

     

    储存条件和效期:

    该试剂盒常温贮存,常温运输。开封后有效期一年。

    产品简介:

    全血基因组DNA 小量提取试剂盒可从200-400 μl体积新鲜、冷冻或抗凝全血样本中快速分离纯化基因组DNA。该试剂盒可以在30分钟内完成单个或多个样品的操作。 提取过程无需使用蛋白酶K消化,不需要酚氯仿抽提, 也无需耗时的异丙醇沉淀等过程 。

    使用该试剂盒提取到的DNA 可以用于PCR,Southern杂交,酶切消化等实验。

    准备工作:

    1. 准备无水乙醇;制冰机;1.5ml离心管;2ml离心管;离心机

    2. 按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后常温贮存备用。

    3. 每次使用前请检查缓冲液DL1和DL2是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

    标准操作步骤:

    如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在常温下离心。

    注意:以下方案适用于400 μl体积新鲜或冷冻血液样本。如果使用低于400 μl的全血样本,必须按比例减少缓冲液DL1和DL2的用量或者用1×PBS溶液补齐至400 μl,严格按照缓冲液DL1:全血:缓冲液DL2=343体积比进行操作,否则将导致后续操作无法进行。

    1. 加入300μl缓冲液DL1于1.5 ml离心管中。

    2. 加入400 μl抗凝全血,漩涡剧烈震荡30秒。 注:如果低于400 μl血液,用1×PBS补齐到400 μl。

    3. 加入300μl缓冲液DL2,剧烈摇动离心管3-5次,漩涡剧烈震荡30秒-60秒。

    注:加入缓冲液DL2后,会出现大量血红蛋白沉淀,必须剧烈震荡。

    4. 12000 rpm 离心2分钟。

    5. 把吸附柱装在2ml收集管中(已提供),将第4步得到的上清溶液全部转入柱中(小心别触及沉淀),12000 rpm离心1min,倒弃流出液重新套上收集管。

    注:吸附柱的承受最大体积是700 μl,如上清超过此体积,可分2次离心,保证所有上清都加到柱中。

    6.加入500 μl 去蛋白液GB(注意是否已经加入乙醇)至柱子中,12000 rpm离心1min,弃去流出液。

    注:吸附柱膜上会有血色素残余,这是正常现象,可以被去蛋白液GD和漂洗液PW洗去。

    7. 将吸附柱重新套回2ml收集管中,加入700μl 漂洗液PW(注意是否已经加入乙醇)至柱子中,12000 rpm离心1min,倒弃流出液;

    8. 再加入500μl 漂洗液PW至柱子中,12000 rpm离心1min, 弃去流出液;

    9. 将吸附柱重新套回2ml收集管中,12000 rpm离心空结合柱2 min以干燥柱子的基质;

    注:这一步骤至关重要,不要省略。 否则残余乙醇会影响后续酶切或PCR实验。

    10. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管,加入50-80 μl65℃预热的洗脱缓冲液EB或灭菌去离子水至柱子的膜中央。 常温静置2 min; 

    注: 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl,体积过小影响回收效率。

      洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。

    11. 12000 rpm离心 2 min洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。

    DNA浓度及纯度检测:

    基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。

    常见问题分析:

    常见问题

    可能原因

    建议

    堵柱子

    样本体积不对,裂解不完全

    未按照说明书使用指定体积操作,请严格按照缓冲液DL1:全血:缓冲液DL2=343体积比进行操作

    回收不到DNA或得率低

    堵柱子

    见上

    化疗病人全血中提取DNA

    化疗病人血液中白细胞数量减少,导致DNA数量降低

    全血样品保存不当,导致全血溶血导致DNA降解

    4℃冰箱中贮存2周的全血开始出现溶血现象,此时DNA随贮存时间延长会程序分解,最终导致分离不到电泳可见的DNA;全血应该-20℃或-80℃贮存。

    去蛋白液GD和漂洗液PW没有按说明书加入乙醇稀释

    使用前按说明书加入适量的无水乙醇进行稀释

    DNA纯度差

    A260/A280比率接近2.0

    考虑全血样品的新鲜程度。陈旧全血中的DNA会降解成小片段DNA或核苷酸混合物,导致A260读数变大

    DNA中有RNA污染

    使用非常新鲜的全血提取DNA时电泳结果会有RNA污染,RNA不能作为扩增模板,不会影响PCR扩增。如要去除RNA,可在步骤1加入缓冲液DL1时同步加入5 μl RNaseA溶液(10mg/ml

    洗涤时柱中有带颜色的遗留物

    未按照说明书使用指定体积操作

    请严格按照缓冲液DL1:全血:缓冲液DL2=343体积比进行操作

    去蛋白液GB和漂洗液PW没有按说明书加入乙醇稀释

    使用前按说明书加入适量的无水乙醇进行稀释

     实验示例:

    400μl human blood gDNA 上样5μl


    人血液基因组扩增人β-球蛋白 1.3kb 片段




TOP】【打印本页】【关闭窗口



中科瑞泰(北京)生物科技有限公司 版权所有 京ICP备12052607 网站管理   快递查询   IF查询
电话:010-58437227 免费电话:400-699-0631 传真:010-57909566
点击这里给我发消息   内勤订货QQ:2446698252   技术支持QQ:460449375 电子邮箱:real-times@vip.163.com
注意:公司所有产品仅供科研使用
_×
在线咨询