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RTG2405 2×CTAB提取缓冲液
 产品货号: RTG2405
 产品名称: RTG2405 2×CTAB提取缓冲液
 产品价格/规格: 200ml 150元/500 ml 300元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2022-08-29
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  • 2×CTAB提取缓冲液

    ● 产品编号及规格:                                             

    货号

    名称

    规格

    贮存

    RTG2405-200ml

    2×CTAB提取缓冲液

    200 ml

    RT

    RTG2405-500ml

    2×CTAB提取缓冲液

    500 ml

    RT

    BME

    还原剂

    1 ml

    RT

     

    说明书

    一份

     

    ● 产品介绍:

        CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7 M NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入醇(乙醇或异丙醇)沉淀即可使核酸分离出来。

        2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v)CTAB100mM Tris (pH 8.0)20mM EDTA,1.4 MNaCl,,还原剂(随用随加)

    ● 储存及运输:

       常温贮存2年;常温运输。

    ● 实验操作步骤:

    DNA提取:

       1. 2×即用型CTAB提取液配制:

    按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液中加入2 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

    2. 材料研磨:

    取0.2-0.5新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 样品裂解:

    按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5 ml离心管中,立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴30分钟,间歇混匀。

    注:提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml,否则后续纯化不能在一个离心管内完成;CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

    4. 离心去杂质:

    14000 g 常温离心5分钟,转移上清至新的1.5 ml离心管中。

    5. 去除RNA:

    上清中加入1/100上清体积的RNaseA溶液(10 mg/ml)(货号:RN001),如500 μl上清中加如5 μl RNaseA溶液,37℃处理20分钟。

    6. 第一次抽提纯化:

    6.1 步骤5溶液中加入等体积的DNA抽提溶液I(25:24:1)(货号:PC1015),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g 离心10分钟,保留上清。

    6.2. 重复抽提一次。

    7. 第二次纯化:

    上清中加入等体积核酸抽提溶液(24:1)(货号:PC1017),颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g离心10分钟,保留上层水相。

    8. 沉淀DNA:

    8.1 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,-20℃静

    置30分钟;

    8.2 14000 g4℃离心10分钟。

    9. 漂洗DNA:

    9.1 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,414000 g 3分钟,吸弃乙醇。

    9.2 4 14000 g 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

    注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。

    10. 贮存DNA:

    加入50-100 μl的超纯水或TE缓冲液(货号:TE1050)溶解DNA,-20保存备用。

    RNA提取:

    注:以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free

    1. 2×即用型CTAB提取液(RNase-free)(货号:RTG2405F)配制(现用现配):

          2×CTAB提取缓冲液中按照1/1000体积加入DEPC,如100 ml中加入100 μl DEPC,混匀后过夜处理,高温高压,即为2×即用型CTAB提取缓冲液(RNase-free)。按照终浓度1 % (v/v)加入还原剂,如1 ml 2×CTAB提取缓冲液(RNase-free)中加入10 μl还原剂。2×即用型CTAB提取液建议现用现配。

    2. 材料研磨:

    取0.2-0.5新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。

    3. 样品裂解:

    按照每100 mg研磨粉末使用0.5 ml提取缓冲液的比例将粉末转入1.5 ml离心管中,立即加入65℃预热的2×即用型CTAB提取缓冲液,65水浴30分钟,间歇混匀。

    注:提取缓冲液使用量不要超过0.7 ml,否则后续纯化不能在一个离心管内完成;CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出,因此,在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃。

    4. 离心去杂质:

    14000 g 常温离心5分钟,转移上清至新的1.5 ml离心管中。

    5. 第一次纯化:

    上清中加入等体积的RNA抽提溶液I(25:24:1)(货号:PC1018),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g 离心10分钟。

    6. 第二次纯化:

    将上清液转入另一1.5 ml离心管中,加入等体积核酸抽提溶液(24:1)(货号:PC1017),颠倒离心管混匀8-10次,常温14000 g离心10分钟。

    7. 沉淀RNA:

    将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入1/2体积7.5 M LiCl(RNase-free)(货号:LC1030),轻柔混匀,-20℃ 静置30分钟;14000 g4℃离心10分钟。

    9. 漂洗RNA:

    9.1 去上清液, 沉淀中加入1ml 70%乙醇(RNase-free),吹打漂洗沉淀,14000 g4℃3分钟,吸弃乙醇。

    9.2 14000 g4℃1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。

    注:RNA沉淀不能过分干燥,否则不好溶解。

    10. 贮存RNA:

    加入50-100 μl的RNase-free水(货号:RF001)溶解RNA,-80保存备用。



  • 使用该产品发表部分文章列表:

    1. [IF=4.35] Combined Effect of High-Pressure Processing with Spice Extracts on Quality of Low-Salt Sausage during Refrigerated Storage.

    Author:Qing Xiao, Mei Xu, Baocai Xu, Conggui Chen, Jieying Deng and Peijun Li

    Journal: Foods. 2021, 10, 2610.

    InstitutionHefei University of Technology

    Paper linkhttps://www.mdpi.com/2304-8158/10/11/2610

    2. [IF=3.579] Effect of Lactobacillus plantarum andStaphylococcus xylosus on flavour development and bacterial communities in Chinese dry fermented sausages.

    Author: YaqingXiao,PeijunLi

    Journal: Food Research International. 2020.

    InstitutionHefei University of Technology

    Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109247



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