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·PCR
 
 





植物基因组提取试剂盒
 产品货号: RTG2404
 产品名称: 植物基因组提取试剂盒
 产品价格/规格: 50次 400元
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 更新时间: 2018-08-27
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    试剂盒内容及保存:

    试剂盒组成

    RTG2404-0150次)

    贮存方式

    缓冲液AP1

    25 ml

    室温

    缓冲液AP2

    10 ml

    室温

    缓冲液AP3(浓缩液)

    15 ml

    室温

    漂洗液PW浓缩液)

    15 ml

    室温

    洗脱缓冲液EB

    15 ml

    室温

    RNase A10 mg/ml

    300μl

    -20

    吸附柱CG(白色)

    50

    室温

    过滤柱CF

    50

    室温

    说明书

    1

     

    储存条件和效期:

    本试剂盒在室温(25℃左右)干燥条件下,可保存1年;更长时间的保存可置于2–8℃。2–8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,应在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。单独包装的RNaseA收到后-20℃保存。

     

    产品简介:

    本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,能提取多种植物细胞/组织中的基因组DNA。离心吸附柱可以高效、专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。

    使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

    提取得率:

    材料

    DNA得量(μg/100mg

    Arabidopsis

    3–4 μg

    Barley

    8–12 μg

    Maize

    15-20

    Pine

    20-25

    Potato

    4-6

    Rape

    2-4

    Spinach

    5-10

    Tobacco

    20-25

    Wheat

    25-30

     

    准备工作:

    1. 准备液氮;65℃水浴;无水乙醇;1.5ml灭菌离心管。

    2. 按照标签所示在缓冲液AP3和漂洗液PW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。

    3. 每次使用前请检查缓冲液AP1,缓冲液AP2和缓冲液AP3是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

    操作步骤:

    如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

    1. 取适量植物新鲜组织500mg-1g加入液氮充分研磨,取约100mg粉末置于1.5ml离心管中,加入400 μl 缓冲液AP1和6 μl RNaseA (10mg/ml),漩涡震荡1分钟。

    2. 将离心管放在65℃水浴10分钟,水浴过程中颠倒离心管以混合样品数次。

    3. 加入130 μl 缓冲液AP2,颠倒混匀,冰浴5分钟。

    4. 12,000rpm离心5分钟。

    注:此步骤离心去除去垢剂,蛋白以及多糖等杂质。

    5. 取上清(通常为400 μl)转移到过滤柱CF中,12,000rpm 离心1分钟。

    6. 将滤出液转移到1.5 ml离心管中,加入1.5倍体积(例如400 μl的上清液加600 μl缓冲液AP3)缓冲液AP3(使用前请注意是否已经加入无水乙醇),立即颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的水珠。

    7.吸取步骤6中的混合液加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放回收集管中。

    注:离心吸附柱的最大容积是700μl,如果一次不能完全上柱,可以分次上柱离心,保证全部溶液全部加到离心柱中。

    8.向吸附柱CG中加入500 μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。

    9.重复步骤8。

    10. 可选步骤:如果离心柱的吸附膜上有颜色,向吸附柱CG中加入500 μl无水乙醇,12,000 rpm离心1分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。

    11.将吸附柱CG放回废液收集管中,12,000 rpm离心2分钟。

    :此步骤非常重要,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。

    12.将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100 μl经65℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,12,000 rpm g离心2分钟。

    ;1. 洗脱缓冲液体积最好不少于50 μl,体积过小影响回收效率。

    2. 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。

    13.  DNA产物-20保存。

     

    DNA浓度及纯度检测:

    基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。


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