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BN电泳介绍及参考文献

温和胶,简写为BN-PAGEBlue Native PAGE),由Sch?gger等建立的一种电泳系统,最初被用来分离牛心脏组织中线粒体上的蛋白质复合体。由于在研究蛋白复合体上的优势,BN-PAGE被用于线粒体膜、类囊体膜、质膜等膜蛋白复合体的研究。在做植物类囊体膜的电泳时,结合叶绿素的蛋白质复合物呈绿色,而不含叶绿素的呈蓝色,因此又称之为蓝绿温和胶电泳。

Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技术。在电泳缓冲液和上样缓冲液中加入了考马斯亮蓝G-250,蛋白质表面结合了大量的考马斯亮蓝染料而带上负电荷,这会导致即使碱性蛋白(pI高于7的蛋白)也会向阴极迁移。

Blue Native PAGE在分析蛋白质-蛋白质相互作用以及膜蛋白复合物方面有很大的优势,其分离范围在100KDa-10MDa。这种方法的缺点是:考马斯亮蓝与蛋白的结合起到了去垢剂的作用,可能导致复合物的分离;并对化学发光或蛋白质辅基的荧光或荧光染料的标记具有潜在的猝灭作用。

Clear Native PAGE是另外一种电泳技术,这是BN-PAGE之后出现的一种技术。可以分离聚丙烯酰胺凝胶(PI小于7)中的酸性水溶性蛋白和膜蛋白。分辨率通常低于BN-PAGE。但是,当考马斯亮蓝G-250染料妨碍进一步分析时,CN-PAGE具有优势。例如,为了测量催化活性(例如线粒体ATP合酶)或分离痕量的膜蛋白以进行荧光共振能量分析,CN-PAGEBN-PAGE更温和。 CN-PAGE可以维持膜蛋白的超分子组装,而BN-PAGE的结构会引起分解。可以通过CN-PAGE检测线粒体ATPase中具有酶促活性的寡聚体,但使用BN-PAGE则不能检测。由于CN-PAGE中没有带电的染料,因此蛋白质在电场中的迁移完全取决于蛋白质的固有电荷,等电点低于7的酸性蛋白才能带上负电荷正常电泳。优点是条件相对温和,在蛋白质组学研究中具有很大的优势。 BN-PAGECN-PAGE的制胶缓冲液与电泳条件相同,但是CN-PAGE的阴极缓冲液(内槽缓冲液)不含考马斯染料,但将0.025%的洋地黄皂苷添加到了凝胶中。


BN电泳参考文献


Blue native PAGE

Hermann Schagger在Nature Protocol上的经典方法。凝胶缓冲液使用咪唑配方。

Blue Native electrophoresis to study mitochondrial and other protein complexes

凝胶缓冲液使用Bis-Tris配方。

相关产品:RTD6139-0312 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(U型板3-12%预制胶,通用型)

          RTD6139-0420 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(U型板4-16%预制胶,通用型)
Advantages and limitations of clear-native PAGE

Hermann Schagger CN-PAGE的优缺点

4 BN系统非梯度凝胶(手灌胶) Non-Gradient Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis

相关产品:RTD6140 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒(手灌胶)

5 BN系统分离动物线粒体复合物 Blue-Native Electrophoresis to Study the OXPHOS Complexes

6 BN系统分离类囊体复合物 Optimized native gel systems for separation of thylakoid protein complexes:novel super- and mega-complexes




BN电泳过程中电泳报错问题:


BN电泳在更换为无色电泳缓冲液后,电流基本在2-5mA,有些电泳电源如伯乐电源有负载检查功能,电流过低(低于4mA) 会认为没有负载,报错E1错误代码,终止电泳。解决方法是更换电泳电源,如使用国产电源;另外可以调高电压高于300V,使得电流不要低于4mA。