Tricine多肽电泳参考文献

何时使用Tricine-SDS-PAGE检测小分子肽？

如果你感兴趣的蛋白小于20KD，你就要使用Tricine-SDS-PAG系统来分离小肽了。Tricine-SDS-PAGE系统是可以分离1-100KD的蛋白质。此系统最适合分离低于30KD的蛋白质。

相关产品：超低分子量蛋白电泳试剂盒（货号：RTD6120）

Tricine-SDS-PAGE与传统SDS-PAGE的区别：

1 分离胶中更高的Tris浓度：终浓度为0.75M；普通SDS-PAGE为0.375M

2 分离胶和浓缩胶中的pH都是8.45

小肽的电泳：

1 关于阴极缓冲液和阳极缓冲液：

Tricine-SDS-PAGE系统不同于常规的SDS-PAGE，使用两种缓冲液电泳。电泳槽内槽是1×阴极缓冲液，含有Tricine和SDS。外槽是1×阳极缓冲液，是0.2M Tris。由于电泳槽内外槽缓冲液不一样，电泳前要检测电泳槽是否漏液，如果漏液的话将导致内外槽缓冲液混合，导致电泳结果不好。如果发现内槽缓冲液漏液，可以将外槽缓冲液加满到和内槽缓冲液齐平。

2 关于电泳时的电压：

浓缩胶一般用稳压80-100V，如果使用新鲜的缓冲液，这时的电流应该在20mA左右，如果电流太小，请检查缓冲液以及电泳设备是否有问题。当指示前沿至浓缩胶和分离胶交界时，电压可以调高到120-150V。整个电泳时间约需2-3小时。

3 关于电泳的指示前沿：

由于溴酚蓝在Tricine-SDS-PAGE系统中泳动很快，很快就跑到缓冲液中去了。超低分子量蛋白Marker和2×Tricine 上样缓冲液中的指示前沿是考马斯亮蓝G-250。电泳中只要指示前沿跑不丢，小肽就不会跑丢。然而，考马斯亮蓝G-250作为指示前沿的缺点是在分离胶中比较弥散。如果电泳时间较短，染色时会遮挡3KD左右的小肽。

4 小肽的染色：

由于小肽还有较少的氨基酸，染色时结合的染料就少，导致染色灵敏度比较低。上样时要加大上样量。另外，低于5KD的小提容易从PAGE胶上脱离，染色前最好有个固定步骤(0.5％戊二醛，30%乙醇)。为了更好的染色小肽，可以选择FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。

 小肽的转膜/Western Blot实验

由于小肽比较小，转膜时要注意小肽非常容易透过PVDF膜。两种方法可以解决这一问题：两张PVDF膜重叠在一起；缩短转膜时间（半干法转移，200mA 15-20分钟就可以了）。转膜使用0.22 μm的PVDF膜。湿转（转膜缓冲液加20%甲醇，不加或少加SDS，200mA 30-35分钟）。

 小肽电泳文献：

1 Schagger, H. & von Jagow, G. Tricine–sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1–100 kDalton. Anal. Biochem. 166, 368–379 (1987). PDF下载

最原始小肽电泳的文献。

2 Schagger, H. Tricine–SDS-PAGE. Nature Protocols. 1,16-23，2006  PDF下载

87年的作者Schagger在Nature Protocols 开刊文章，写的精细，值得推荐。

3 两篇国内文献，主要讨论尿素的作用。

多肽的电泳分离 2004

有效分离1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法 2004