非变性蛋白电泳Marker转膜问题

非变性蛋白电泳Marker转膜问题

1. 所有的预染蛋白Marker都是变性Marker，不适用于非变性电泳。

2. 蛋白非变性电泳条件下，不能精确判断蛋白的分子量大小。因为在非变性条件下，蛋白的电荷，空间结构，物化性质等都对蛋白的迁移有影响。

3. 非变性蛋白电泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然结构，都没有偶联染料，在电泳时基本都看不到条带；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有铁离子，使得电泳后在胶上可见淡黄色，其中440 kD颜色更深。凝胶转膜后，膜上也可以看到黄色的440 kD条带（下图），可以大体判断Marker转膜的效果。

4. 有两种方法可以解决非变性Marker转膜后条带显示问题：

第一种方法：凝胶转膜后用丽春红染色液（货号：RTD6301）染膜，可以看到Marker条带，顺便可以检测转膜效率，然而要注意的是丽春红染色灵敏度比较低，可能不能完全看到完整的Marker条带。

       注：北京师范大学惠赠图片

第二种方法（下图）：电泳结束后，把含有Marker泳道的凝胶切下，单独用考马斯亮蓝染色液染色（货号：RTD6202），剩余的凝胶去完成转膜到ECL发光检测过程，最后的发光结果和Marker染色结果拼接判断条带范围。