电泳还原与非还原区别

电泳还原与非还原区别

聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）为网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式：非变性电泳（Native-PAGE）和变性电泳（SDS-PAGE）。非变性电泳，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开；而变性电泳（SDS-PAGE）仅根据蛋白质亚基分子量的不同分开蛋白质（可以忽略电荷因素）。SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。

强还原剂，如巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。有些蛋白含有二聚体或多聚体，如果加入β-巯基乙醇，它会还原多聚蛋白之间和内部的二硫键，这样，电泳的样品将会被完全还原成单体甚至亚基形式，不加还原剂的样品则会保持聚体的形式。

SDS-PAGE有非还原SDS-PAGE和还原SDS-PAGE之分，均是变性条件下的电泳。非还原与还原的区别是在样品处理时是否加入还原剂（如β-巯基乙醇或DTT等）。

在进行电泳方法选择时，首先要明确目标蛋白的结构特点，以及电泳目的预期，来决定是否需加入还原剂。

如需测定目标蛋白的纯度及分子量（为多聚体分子量），则一般采用非还原SDS-PAGE：采用该电泳方法，二聚体、多聚体在凝胶中的位置会处于单体分子量2倍或多倍的位置，利于观察及各组分的定性定量分析。当然这种蛋白的聚体形成是依靠二硫键来维持的。

如果仅需测定蛋白质亚基结构的分子量，则需采用还原SDS-PAGE，将二聚体、多聚体降解为单体，理想情况下，若还原充分，仅可见亚基条带。