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RTD6138-0312 3-12%RealPAGE Native BN/CN 预制胶(U型板,通用型,12孔)
 产品货号: RTD6138-0312
 产品名称: RTD6138-0312 3-12%RealPAGE Native BN/CN 预制胶(U型板,通用型,12孔)
 产品价格/规格: 10板/盒 1000元
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 更新时间: 2021-05-22
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  • RealPAGE Native BN/CN 预制胶(U型板,通用型,12)

           RealPAGE Native BN/CN Precast Gels(U Type Plate,Universal,12 Wells)

    ● 货品规格:

    货号

    名称

    分离范围

    规格

    保存

    RTD6138-0312

    3-12% RealPAGE Native BN/CN 预制胶

    (U型板,通用型,12 )

    30-10000 kD

    10

    4

    RTD6138-0416

    4-16% RealPAGE Native BN/CN 预制胶

    (U型板,通用型,12 )

    15-1000 kD

    10

    4

    ● 产品简介:

    Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一种从生物样品(质膜,胞浆等)中分离分子量10 kD-10000 kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM,digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷,根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是电泳缓冲液中不加入任何染料,电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态,然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在,使蛋白都覆盖上负电荷,可以分离碱性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只适合于酸性蛋白(pI<7)的分离。

    本产品可以用于分离分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白复合体,样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验,也可直接用于电洗脱制备蛋白。

    ● 运输和贮存:

    本产品常温运输;凝胶4-8℃贮存,不要冷冻;有效期6个月。

    ● 使用说明:

    样品制备:

       样品具体制备方法参考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006. 

    电泳:

    2.1 拆开预制胶包装,将预制胶安装在合适的电泳槽中。

    注:伯乐Mini IIIMini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向(下图)。


    六一其他系列,君意东方JY-SCZ2/4,百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。

    不兼容Thermol系列电泳槽。

    2.2 准备电泳缓冲液:

    10×BN/CN电泳缓冲液稀释10倍即配成1×BN/CN电泳缓冲液。

    2.2.1 CN-PAGE电泳:

    内槽缓冲液(阴极缓冲液)和外槽缓冲液(阳极缓冲液)均直接使用1×BN/CN电泳缓冲液进行电泳。

    2.2.2 BN-PAGE电泳:

    外槽缓冲液使用1×BN/CN电泳缓冲液,内槽缓冲液按照下表配制:

     

    1×蓝色阴极缓冲液

     

    150 ml

    10×BN/CN电泳缓冲液

    15 ml

    0.4% G-250 染料(电泳用)

    0.75 ml

    超纯水

    定容至150 ml

    2.3准备样品:

    2.3.1 CN-PAGE电泳:

    总体积

    10 μl

    蛋白样品

    x μl

    4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

    2.5 μl

    超纯水

    补至10 μl

     

    不要加热

    2.3.2 BN-PAGE电泳:

    注:以下以植物类囊体膜蛋白电泳为例。

    总体积

    10 μl

    10 μl

     

    含去垢剂样品*

    不含去垢剂样品

    蛋白样品

    x μl

    x μl

    4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

    2.5 μl

    2.5 μl

    5% G-250染料(蛋白上样)

    0.25-1 μl

    0.1 μl(终浓度0.05%)或不加

    超纯水

    补至10 μl

    补至10 μl

     

    不要加热

    不要加热

    * 含去垢剂样品中染料加入按照以下原则:

    样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4

    例如样品中DDM终浓度为1%,则需要G-250终浓度为0.25%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

    2.4电泳过程;

    2.4.1 CN-PAGE电泳:

    电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻拨出预制胶梳子,用1ml吸头冲洗加样孔3次,随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。

    CN-PAGE电泳

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    120V

    10-15mA/板胶

    4-10mA/板胶

    50+min

    注:冰浴电泳

    2.4.2 BN-PAGE电泳:

    BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN电泳缓冲液;内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液,冰浴电泳,等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时,将电泳缓冲液更换为1×BN/CN电泳缓冲液,继续后续电泳,因为过多染料会影响蛋白在凝胶中的迁移以及蛋白后续的转膜实验。


    BN-PAGE电泳条件(一板胶)

    恒电压

    起始电流

    电泳时间

    缓冲液

     

    120 V

    8-15 mA

    20-25 min

    1×蓝色阴极缓冲液

    冰浴电泳

    指示前沿至凝胶三分之一处,更换内槽缓冲液为1×BN/CN 电泳缓冲液





    恒电压

    继续电泳时间

    结束电流

    缓冲液

     

    120 V

    45 min +

    3-5 mA

    1×BN/CN电泳缓冲液

    冰浴电泳

    实验示例:

     

    BN-PAGE 3-12% Precast Gel

    恒压 120V 1.5 小时 冰浴电泳


     

    BN-PAGE 4-16% Precast Gel

    恒压 120V 2 h 1×BN/CN电泳缓冲液 冰浴电泳


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