10×CAPS转膜缓冲液

● 简介：

10×CAPS转膜缓冲液（10×CAPS Transfer Buffer）适用于蛋白电泳后凝胶上蛋白的转膜，主要成分为CAPS[3-（环己氨基）-1-丙磺酸]。本转膜液配制便捷，稀释后无需调节pH值，pH约为11.0。由于缓冲液具有较高的pH，特别适合于碱性蛋白非变性电泳后的转膜实验。另外，由于缓冲液中不含有甘氨酸，转膜后的蛋白可以进行N端测序。

该缓冲液最终可配成至少5升即用型1×缓冲液（根据需求补加甲醇）。

● 保存和运输：

4℃保存，常温运输，一年有效；配成1×含甲醇溶液后4℃贮存，1个月有效。

● 配制方法：

将10×转膜缓冲液稀释10倍，根据实验需求加或不加甲醇，即配成1×即用型转膜缓冲液。

注：非变性蛋白电泳转膜不加或少加甲醇；变性蛋白电泳转膜可以加终浓度低于10%甲醇。

● 使用方法：

1. 转膜方法：使用CAPS转膜缓冲液，电泳后的转膜建议用湿转法。

2. 膜的选择：转膜可以使用PVDF膜和NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径，低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。

3. 三明治结构：转膜三明治结构与传统转膜相同，即根据“黑胶白膜”制作三明治，即膜置于转膜夹芯正极一侧，凝胶置于转膜夹芯负极一侧，这样凝胶上带负电荷的蛋白才能转移到膜上。

蛋白转膜三明治制作：

负极（电转夹黑色面）-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）

4. 转膜条件：

以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白大小，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。

5. 进行后续WB操作：封闭-一抗-二抗-检测。