您好,欢迎光临中科瑞泰!

免费咨询电话:
400-699-0631

首页 > 蛋白生物学 > 相关溶液 > 蛋白上样缓冲液

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)

产品编号:PL115

产品规格:10ml

数量
价格 ¥50

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)

SDS-PAGE Protein Loading Buffer1×)

产品编号

产品名称

包装

贮存

PL115

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)

10 ml

-20

-

说明书

一份

 

● 产品简介:

SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE Protein Loading Buffer, 1×),是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的蛋白上样缓冲液。可以直接用于细胞或组织样品的裂解,并用于后续常规的SDS-PAGE蛋白样品的上样。使用该产品直接裂解蛋白样品的优点是比较便捷;缺点是裂解好的蛋白样品不能用常规的蛋白定量方法测定蛋白浓度。这样蛋白上样量的均一性就较难控制,需要借助考马斯亮蓝等的染色结果或Western的检测结果,来调整上样量。当细胞量或组织用量能控制得比较均一时,使用本裂解液直接裂解获取蛋白样品会比较便捷。

本缓冲液已经含有还原剂DTT,有轻微刺激性气味。

● 保存条件:

-20℃保存,开封后有效期1年。

●  使用方法:

1. 在常温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(1×)。水浴溶解后立即常温存放,尽量避免长时间置于水浴中。

2. 细胞样品:

2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6 孔板每孔(细胞数量~2.5×106)加入150-250微升SDS-PAGE上样缓冲液(1×)的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使SDS-PAGE上样缓冲液(1×)和细胞充分接触。通常SDS-PAGE上样缓冲液(1×)接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。裂解后的样品收集到1.5 ml离心管内。

2.2 对于悬浮细胞:450 g 4℃离心5分钟收集细胞,弃上清,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板(细胞数量~2.5×106)每孔细胞加入150-250微升SDS-PAGE上样缓冲液(1×),再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

3.组织样品:

3.1 把组织剪切成细小的碎片。

3.2 按照每20毫克组织加入150-250微升SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)的比例加入缓冲液。

注:如果裂解不充分可以适当添加更多的上样缓冲液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少上样缓冲液的用量。

3.3 用玻璃匀浆器匀浆或者用27#针头抽打5-10次,直至充分裂解。

3.4 充分裂解后,将样品收集到1.5 ml离心管内。

注:如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋震荡使样品裂解充分。直接裂解的优点是比较方便,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

4. 95-100℃加热10分钟,以充分变性蛋白。

注:加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体,通常在上样缓冲液内加热8-10分钟后该粘稠的半透明状物体消失。如果起始时细胞或组织的用量较大,基因组DNA含量较高,加热10分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体。此时需要再煮沸10分钟或者补加适量1×的蛋白上样缓冲液后再煮沸5分钟。充分煮沸后一方面可以使结合在基因组DNA上的蛋白充分释放,同时会导致基因组DNA的部分断裂从而使粘稠感消失,这样就不会影响后续的上样操作了。

5. 样品冷却到常温后,12000 rpm离心2分钟,上清即可直接上样到SDS-PAGE凝胶加样孔内。通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。

使用PL115 SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(1×)  发表部分文章列表:

1. [IF=8.947] Physiological cyclic stretching potentiates the cell–cell junctions in vascular endothelial layer formed on aligned fiber substrate.

Author: Yu Shi, Donghong Li, Bingcheng Yi, Han Tang, Tingting Xu, Yanzhong Zhang

Journal: Biomaterials Advances 157 (2024) 213751

InstitutionCollege of Biological Science and Medical Engineering, Donghua University

Paper linkhttps://doi.org/10.1016/j.bioadv.2023.213751  


 
只有购买过该商品的用户才能进行评价。[发表评价]