Anti-Lamin B1抗体（兔单抗）

Anti-Lamin B1 Antibody（Monoclonal Antibody from Rabbit）

● 产品简介

Lamin B1是由LMNB1基因编码一种核纤层蛋白质。在动物细胞中，3种基因编码了至少7种核纤层蛋白。LMNA基因通过可变剪接编码A型和C型核纤层蛋白，而LMNB1和LMNB2分别编码核纤层蛋白B1和B2。B型核纤层蛋白存在于每个细胞。A型核纤层蛋白在原肠胚形成后表达，C型核纤层蛋白的表达是组织特异性的。在核纤层蛋白中，核纤层蛋白B1往往被用作核被膜内参。核纤层蛋白B1在物种间是高度保守的，分子量为~68kD。

注：WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry; IF, Immunofluorescence

● 贮存形式：

稳定溶液，1 mg/ml 抗体溶于PBS，50%甘油，pH7.2。

● 保存及运输条件：

-20℃保存，一年有效；避免反复冻融；湿冰运输。

● 使用说明：

1. Western Blot杂交(ECL显色)：1:1000-5000稀释，常温孵育1-2 h或4℃过夜。

2. 免疫荧光（IF）和免疫组化（IHC）：1:200-1000稀释。

● 实验示例：

1 变性检测：

总蛋白提取：5×10⁶ K562细胞，400 g 离心收集，去上清，沉淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分钟，4℃ 16000 g 15 分钟，上清即为总蛋白（TP）。

电泳：4-15%RealPAGE Tris-Glycine预制胶（货号：RTD6117-0415）；1×TGS 200V 55min

转膜：0.45μm PVDF膜，1×RealBlot快速转膜液 400 mA 40 min，电压变化85-68 V

ECL发光：RealECL发光液（货号：EC2520）；化学发光成像系统（货号：RT523）曝光1秒。

2 非变性检测：

实验程序：

样品提取：K562细胞 1×107细胞，400 g 离心3 min收集，1×PBS清洗2次，细胞沉淀中加入0.6 ml
非变性裂解液（货号：RL1080），轻柔悬浮细胞，4度冰浴15min，间歇混匀，
4度 16000 g 15 min，收集上清。
电泳上样样品制备：BCA蛋白浓度测定试剂盒测定浓度（货号：RTP7102），
样品加入4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液（货号：PL114 ），调配为0.3 μg/μl上样液，
上样40 μl（12 μg）。
样品1：RL1080提取样品，加终浓度0.125% G-250（5% G-250染料，货号：BC260）；
样品2：RL1080提取样品，不加G-250；
样品3：RL1080提取样品使用离心式去垢剂去除柱（货号：DD0550）去除去垢剂，
样品4：柱式动物胞浆蛋白提取试剂盒(细胞样品,非变性提取,不含去垢剂)（货号:RTD8106）提取样品；
凝胶制备：Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒（手灌胶）（货号：RTD6140）
制备10% 厚度1.5 mm凝胶；
电泳：使用10×BN电泳缓冲液（货号：BC500P）。开始电泳用1×蓝色BN电泳缓冲液（0.02%G250），
恒压200 V 51min后，换无色1×BN 电泳缓冲液,电泳时间共104 min
凝胶预处理：凝胶浸泡于1×BN转膜缓冲液+0.1%SDS中 摇床慢摇10 min
湿转法转膜：用10×BN转膜缓冲液（货号：BC600P）配制1×BN转膜缓冲液+20%甲醇，用0.45 μm 
PVDF，恒流200 mA（电压变化114-83 V） 2小时，未冰浴（缓冲液水温36度）。膜用无水甲醇去除蓝色
封闭：Western快速封闭液（货号：WR5020）快速封闭 10 min
GAPDH检测：GAPDH 兔单抗（货号：RGA1150） 1:10000 过夜孵育；
羊抗兔IgG-HRP 1:5000（货号：HGR1020） RT 1h，ECL 1秒
抗体清除：PVDF膜用Western一抗二抗去除液（弱碱，温和型）（货号：WS1200） 清除30min，
Western快速封闭液（货号：WR5020）快速封闭 10min。
Lamin B1检测：Anti-Lamin B1抗体（兔单抗）（货号：RGL1150）1：3000 RT 1h，
羊抗兔IgG-HRP 1:5000（货号：HGR1020） RT 1h，ECL 8秒