SDS裂解液

● 产品包装：

● 产品简介：

SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液，其主要成分是Tris  (pH8.0)， SDS，EDTA等。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。由于SDS裂解液有较强的裂解能力，IP或Co-IP实验不建议使用该裂解液。由于含有较高浓度的SDS等干扰物质，不能用传统Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（货号：RTP7102）或Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）（货号：RTP7104）测定蛋白浓度。

● 贮存、效期及运输：

常温保存；有效期2年；常温运输。

● 注意事项：

1. 需自备蛋白酶抑制剂如PMSF。

2. 如果使用本SDS裂解液用于ChIP实验，在对超声后基因组DNA大小进行检测时，如果采用琼脂糖凝胶中添加花菁素类染料如GelRed或类似染料或使用含该类染料的DNA上样缓冲液时，由于电泳时SDS会与此类染料结合形成异常条带，条带通常在600-1000 bp左右，因此会对超声后基因组DNA大小的判断造成一定的影响。建议采用后染方法即“电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色”的方式进行条带大小的检测，使用该方法不会有异常条带出现，不影响对超声后基因组DNA大小的判断，而且条带大小更准确。

● 使用说明：

1.  准备SDS裂解液：

取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入1/100体积的100 mM PMSF（货号：PM1790），使PMSF的最终浓度为1 mM或加入其他蛋白酶抑制剂。

注：SDS裂解液低温会析出结晶，以下操作需保持常温操作。

2. 细胞蛋白提取：

2.1 贴壁细胞：去除培养液，加入适量1×PBS，轻柔漂洗一遍，不要扰动贴壁细胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，用细胞刮刀刮下细胞收集于1.5 ml离心管中。

2.2 悬浮细胞：450 g 4℃ 离心5 min收集细胞；用适量1×PBS重悬细胞，450 g 4℃ 离心5 min收集细胞；重复漂洗细胞一次；按照细胞沉淀体积（PCM）20 μl加入200 μl 裂解液的比例加入SDS裂解液，混匀细胞沉淀。

注：2×10⁶ Jurkat细胞，其细胞沉淀体积（PCM，Packed Cell Volume）大约为20 μl。

2.3 裂解细胞：

2.3.1 裂解混合物超声波处理（超声条件根据仪器调整）；如没有超声破碎仪，可以使用注射器用27G针头处理裂解物10-15次（货号：PE2719 ，蛋白提取针头套装），以彻底裂解细胞。

注：裂解中细胞会释放出变性的核酸，呈团状粘稠透明样，如不进行超声或针头裂解处理，会导致裂解物非常粘稠，大大降低蛋白提取的得率和纯度。

2.3.2 裂解物95℃处理10分钟，间歇混匀。

2.4 离心收集上清：

充分裂解后，常温16000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western等操作。

3. 组织蛋白提取：

3.1 手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸

干组织表面液体，将组织切成细小的碎片。

3.2 按照每20 mg组织加入200 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)

3.3 用玻璃匀浆器匀浆5-10次，收集匀浆后的裂解混合物，超声波处理（超声条件根据仪器调整）；如没有超声破碎仪，可以使用注射器用27G针头处理裂解物10-15次（货号：PE2719 ，蛋白提取针头套装），以彻底裂解细胞。

注：裂解中细胞会释放出变性的核酸，呈团状粘稠透明样，如不进行超声或针头裂解处理，会导致裂解物非常粘稠，大大降低蛋白提取的得率和纯度。

3.4 裂解物95℃处理10分钟，间歇混匀。

3.5 常温16000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western等操作。

●  实验示例：

4-18% RealPAGE 预制胶

电泳条件：1×TGS 稳压200V 38-13mA 50min;染色：FastBlue蛋白染色液染色30min。

样品1（LD直裂）：2 ml K562细胞（6.5×106/ml），3000rpm 5min，沉淀用PBS清洗1次，离心后彻底去除PBS，加入130 μl超纯水，100 μl5×loading buffer(变性，还原)，95度10 min，上样5 μl。

样品2（4K-BME）：1 ml 4K细菌细胞（O/N培养），13000  rpm 5min，离心后彻底去除残余液体，加入130 μl超纯水，100 μl 5×loading buffer，95度10min，上样7.5 μl。

样品3：1 ml K562细胞（5×106/ml），3000 rpm 5 min，沉淀用PBS清洗1次，离心后彻底去除PBS，加入500 μl SDS裂解缓冲液，超声处理（10%功率，开5S，关10S，2min），冰浴10 min或95度10min，间歇混匀，13000 rpm低温离心10 min，取上清即为总蛋白。加入5×loading buffer(变性,还原)调整样品浓度为2 μg/μl，95度5min，上样5，7.5和10 μl。