10×RealBlot 快速转膜液

                 10×RealBlot Rapid Transfer buffer            

● 产品组成：

● 产品简介：

快速转膜液使用独特配方，能高效快速地将蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。使用湿转法（Tank blot）或半干转法（Semi-dry blot）方法，能在10-40分钟内完成转膜过程。

快速和环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。

兼容性好：快速转膜液能兼容Laemmli胶，预制胶，Bis-Tris胶等多种凝胶。

转移效率高：快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率，有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

● 贮存及运输：

  4-8℃贮存，有效期一年；常温运输。

● 使用说明：

转膜前的准备：

6-10张裁好的普通滤纸或Whatman3MM滤纸；裁好的转印膜；足够的1×快速转移buffer；无水甲醇（处理PVDF膜用）

一 湿转法（Tank blot）：

1 按照下表配制1×快速转膜液

2 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。

3 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟；NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。

4 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意：水中漂洗时间一定不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5 按照以下顺序做好转印三明治结构：

1 负极（阴极）

2 一块海绵

3 滤纸（3张）

4 凝胶

5 转印膜

6滤纸（3张）

7 一块海绵（根据三明治的厚度选择是否使用）

8 正极（阳极）

注意：  ① 要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。

 ② 三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话，可以去除阳极一侧的海绵。

6 将三明治结构放于转移槽中，转印槽中灌满1×快速转膜液。

7 湿转推荐使用恒流转移：

二 半干转（Semi-dry blot）：

1 按照下表配制1×快速转膜液：

2 将滤纸浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿。

3 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。

4 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟，去除胶表面的SDS；随后将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。

注意：水中漂洗时间不能超过2分钟，否则分子量较大的蛋白可能不能完全转移。

5 按照以下顺序做好转印三明治结构：

1 负极（阴极）

2 下层滤纸（5张）

3 凝胶

4 转印膜

5 上层滤纸（5张）

6 正极（阳极）

半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小，一般是下层滤纸>=膜>=胶>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，接触的滤纸和气泡会造成短路。

6 半干转推荐使用恒流转移：

注：不同厂家半干转仪器设置可能有所不同，请根据厂家说明书适当调整。

三 问题解决：

 实验示例：