Tris-Tricine-PAGE蛋白电泳试剂盒（含预制胶）

Tris-Tricine-PAGE Protein Electrophorosis Kit Contaning Precast Gels

● 货品内容：

● 产品简介：

Tris-Tricine-PAGE电泳试剂盒含有RealPAGE Tricine蛋白预制胶，可以用来检测2.5-40 kD的多肽大小。试剂盒里含有电泳缓冲液、上样缓冲液和蛋白染色液，方便使用。

预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝胶尺寸8.3×7.5 cm，凝胶厚度1.1 mm，梳子12齿，最大上样体积30 μl，兼容伯乐电泳槽。

该产品配套胶板和缓冲液可以进行5次电泳。

● 贮存、运输和效期：

按照标签温度贮存；常温运输；有效期1个月。

● 使用说明：

一. 电泳缓冲液配制：

10×Tris-Tricine -SDS缓冲液配制：

将10×Tris-Tricine -SDS缓冲液（10×TTS）粉末（Cat：CB010P）置于一干净的烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml 10×TTS缓冲液。用前稀释10倍配成1×TTS缓冲液。

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用300-350 ml 1×TTS缓冲液。

二. 样品处理：

      待上样的检测样品与2×Tricine多肽上样缓冲液[Cat：TP050]等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要95℃处理5分钟）。

三. 电泳：

3.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。

注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（右图）。

六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。

不兼容Thermol系列电泳槽。

3.2 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表1），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。

表1 多肽电泳条件

四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）

4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），蛋白条带含量高于1μg的，染色1-2分钟即可见。

4.2 摇床上常温摇动10-15分钟，至条带清晰可见满足实验要求后停止染色。

4.3 蒸馏水漂洗凝胶，在蒸馏水中脱色摇动10-15分钟，至凝胶基本无蓝色背景，拍照记录结果。

五. 转膜：

多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇处理润湿）或0.22 μm NC膜。

5.1 半干转：

使用伯乐Trans-Blot Turbo半干转机器请选择配套的5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。转膜推荐条件：一板小型凝胶（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10 min。

5.2 湿转：

湿转转膜缓冲液：25 mM Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3。

转膜条件：恒流200 mA  40-60 min

六. 实验示例：