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超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)(非预染)

超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)(非预染)

产品编号:RTD6127

产品规格:10次(50μl)

数量
价格 ¥200

超低分子量蛋白Marker IV3.3-45kD

产品编号及规格:

RTD6127   10T50μl

储存条件: -20℃保存,开封后有效期12个月。

产品简介:本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 

 

 使用说明:

第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底;本产品每次使用前,95加热处理5分钟

. 制胶:

I 配制分离胶

1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

2.加入10%APSTEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

4.静置5-10分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

表一  (一块0.75mm mini胶用量)

 

分离胶

浓缩胶

 

18T, 5%C /6.0 ml

5T, 3.3%C/2 ml

40% PAA19:1

2.7 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.25 ml

4×多肽电泳凝胶缓冲液

1.5 ml

0.5 ml

乙二醇(电泳级)

1.8 ml

/

ddH2O

/

1.25 ml

10APS

50-65 μl

20 μl

TEMED

6 μl

2 μl

注:如非必须,不要使用1.0mm1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。


II 配制浓缩胶

去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。

1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

4.静置20-30分钟装待凝胶聚合

. 电泳:

1. 取一管分装好的Marker样品,彻底融化,95加热处理5分钟,充分混匀后备用。1mm厚度凝胶10齿梳子推荐上样5μl,其他厚度和梳子调整后上样。

2. 电泳前,将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液(Cat No:CB010)用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(样品已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No:TP050]处理)加入点样孔,根据表二条件进行电泳,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。

表二 多肽电泳条件

恒电压

150 V

起始电流

45-55 mA

结束电流

 10-15 mA

电泳时间

2-3小时

. 染色

根据常规实验步骤,用配方5和6(表三)进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的FastBlue蛋白染色液(Cat NoRTD6202,该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。

表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

1. 40%PAA29:1)(配制浓缩胶)

Cat No:AC2914

   丙稀酰胺       38.67g

   甲叉双丙稀酰胺 1.33g

 ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

贮存:4避光保存

2.  40% PAA19:1 (配制分离胶)

Cat No:AC1914

丙稀酰胺      38 g

甲叉双丙稀酰胺 2 g

ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

贮存:4避光保存

3. 4×多肽电泳凝胶缓冲液(配制凝胶用)

[3MTris; 0.4% SDS; pH8.45]

Cat No:GB010

Tris 36.3 g

ddH2O 80ml

0.4 g SDS4 ml 10SDS

HClpH值至8.45ddH2O定容至100 ml

贮存:4


4. 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液

[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

Cat No:CB010

Tris 121.14g

Tricine 179.2g

SDS10g

ddH2O溶解,定容至1000ml(不用调pH)

贮存:4

注:使用前稀释成缓冲液使用

5. 染色液

冰醋酸            100 ml

甲醇              450 ml

考马斯亮蓝G-250  0.25 g

                450 ml

 

6. 脱色液

冰醋酸  100ml

      900ml

7.  2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml

Cat No:TP050

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇)

2mg 考马斯亮蓝G-250

用灭菌ddH2O定容至10ml

混匀分装-20贮存备用

 

超低分子量蛋白MarkerIV附加说明


 















由于小肽的氨基酸数目较少,表观分子量受氨基酸种类影响很大,同一小肽在不同的电泳系统中表现为分子量大小可能不一样。超低分子量蛋白Marker IV中的倒数第二条带即为这种情况。在使用4×多肽电泳凝胶缓冲液加乙二醇的凝胶系统中(RTD6127附带说明书系统),表观分子量为10KD(上图左);而在使用超低分子量试剂盒系统(RTD6120)电泳时,表观分子量为5.5KD(上图右)。


多肽电泳配套试剂

名称

货号

规格

超低分子量蛋白电泳试剂盒

RTD6120

10

超低分子量蛋白Marker I3.3-20.1 kD

RTD6101

10次(100 μl

超低分子量蛋白Marker III3.4-100 kD

RTD6125

10次(50 μl

彩虹预染超低分子量蛋白Marker1.2-45 kD

RTD6110

10 50 μl

彩虹预染超低分子量蛋白Marker II3-40 kD

RTD6145-01

10 50 μl

40% PAA19:1

AC1914-01

100ml

40% PAA29:1

AC2914-01

100ml

多肽电泳凝胶缓冲液

GB010-100ml

100ml

2×Tricine 上样缓冲液(变性,还原)

TP050

10×1ml

FastBlue蛋白染色液

RTD6202

500ml

乙二醇(电泳级)

EA0582-02

100 ml

10×Tris-Tricine-SDS缓冲液(变性电泳,粉末型)

CB010P

500 ml

10×阳极缓冲液 (多肽电泳用

AB080

250 ml

10×阴极缓冲液(多肽电泳用)

CB010

100 ml

 




使用RTD6127超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)蛋白Marker产品发表部分文章列表:

 

1. [2021 IF=2.99] Purifcation, characterization, and action mechanism of plantaricin DL3, a novel bacteriocin against Pseudomonas aeruginosa produced by Lactobacillus plantarum DL3 from Chinese Suan Tsai.

Author: Xinran Lv,  Yang Lin ,Yu Jie, Mengtong Sun, Bolin Zhang,Fengling Bai,Hongfei Zhao,Jianrong Li

Marker: RTD6127,超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45 kD)

Journal: European Food Research and Technology. Vol 244, pages 323–331 (2018)

InstitutionCollege of Biological Science and Biotechnology, Beijing Forestry University

Paper linkhttps://link.springer.com/article/10.1007/s00217-017-2958-3



 
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