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非变性蛋白电泳Marker转膜问题
http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248
非变性电泳蛋白质Marker（45-880
kD）
Native
Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）
●产品编号及规格：
RTD6137 20次 100
μl
●储存及运输条件：
-20℃保存，湿冰运输，有效期为12个月。
● 产品简介：
本产品有4种蛋白组成，分子量范围为45-880
kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到5条主带。
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蛋白名称
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分子量(kD)
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蛋白来源
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pI
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说明
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非变性下440kD和880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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单体分子量29kD，非变性下为多聚体，表现为多种电荷异构体（charge
isomer）
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Albumin
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66
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bovine
serum
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4.6-5.8
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球蛋白，单体分子量66
kD，非变性下可形成少量二聚体
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或
4.59
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球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge
isomer）
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● 使用说明：
1. 取出产品后，常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6130）或者蛋白预制胶（货号RTD6118）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。
3. 电泳条件：
建议使用8%非变性等度胶或者4-15%非变性梯度胶进行电泳。
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恒电压
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150-200 V
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起始电流
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27-35 mA/板胶
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结束电流
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7-10 mA/板胶
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电泳时间
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50-80min+
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4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。
注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。
注意：
1.本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白非变性电泳条件下，不能精确判断蛋白的分子量大小。因为在非变性条件下，蛋白的电荷，空间结构，物化性质等都对蛋白的迁移有影响。
3.非变性蛋白电泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然结构，都没有偶联染料，在电泳时基本都看不到条带；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有铁离子，使得电泳后在胶上可见淡黄色，其中440 kD颜色更深。凝胶转膜后，膜上也可以看到黄色的440 kD条带，可以大体判断Marker转膜的效果。
4. 非变性Marker转膜后可以后用丽春红染色液（货号：RTD6301）染膜，可以看到Marker条带，顺便可以检测转膜效率，然而要注意的是丽春红染色灵敏度比较低，可能不能完全看到完整的Marker条带。
● 实验示例：
使用RTD6137非变性电泳蛋白质Marker（45-880
kD）产品发表部分文章列表：
1.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin,
Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen
Marker: RTD6137非变性电泳蛋白质Marker（45-880 kD）
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3