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非变性蛋白电泳Marker转膜问题
http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248
宽分子量非变性电泳蛋白质Marker（21-880
kD）
Broad
MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880
kD）
●产品编号及规格：
RTD6144 20次 100
μl
●储存及运输条件：
-20℃保存，湿冰运输，有效期为12个月。
● 产品简介：
本产品有5种蛋白组成，分子量范围为21-880
kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到5条主带。
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蛋白名称
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分子量(kD)
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蛋白来源
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pI
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说明
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非变性下440kD和880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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单体分子量29kD，非变性下为10聚体，低于300kD有电荷异构体（charge
isomer）
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Lactic
Dehydrogenase
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165
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Microorganism
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4.5
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球蛋白，单体分子量36 kD，非变性下可形成四聚体
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或4.59
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球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge
isomer）
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Trypsin
Inhibitor
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21
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Soybean
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4.5
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非变性下21 kD
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● 使用说明：
1. 取出产品后，常温融化后，彻底混匀，上样电泳。
注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。
2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6130）或者蛋白预制胶（货号RTD6118）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。
3. 电泳条件：
建议使用10%非变性胶或者4-20%梯度非变性胶（货号：RTD6118-0420）进行电泳。
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恒电压
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120 V
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起始电流
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27-35 mA/板胶
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结束电流
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7-10 mA/板胶
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电泳时间
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1h20min+
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4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。
注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。
注意：
1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。
2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。
● 实验示例：
1 4-20% Tris-甘氨酸 非变性胶电泳：
4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA 47min
2. 4-16% Blue Native：
3： 4-15% Tris-甘氨酸非变性：
