彩虹预染超低分子量蛋白质Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●产品编号及规格：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 储存条件：
-20℃保存，有效期12个月
● 产品简介：
彩虹预染超低分子量蛋白质Marker II可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品由9种多肽和蛋白质组成，分子量大小为 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（绿色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（红色） (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。)。
● 使用说明：
第一次收到该产品，常温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底。
一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40% PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1
cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。
4．静置15-30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 （一块1 mm mini胶用量）
|
|
分离胶
|
浓缩胶
|
|
|
18％T, 5%C /5 ml
|
5％T, 3.3%C/2 ml
|
|
40% PAA（19:1）
|
2.25 ml
|
/
|
|
40% PAA (29:1)
|
/
|
0.25 ml
|
|
4×凝胶缓冲液
|
1.25 ml
|
0.5 ml
|
|
乙二醇（电泳级）
|
1.5 ml
|
/
|
|
ddH2O
|
/
|
1.25ml
|
|
10％APS
|
50 μl
|
20 μl
|
|
TEMED
|
5 μl
|
2 μl
|
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留乙醇吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置30-60分钟装待凝胶聚合
二. 电泳：
1. 取Marker样品，充分混匀后备用。不要加热处理。
2. 电泳前，将10×阳极缓冲液（Cat No：AB080）和10×阴极缓冲液（Cat No：CB010）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，参考下表进行电泳，至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。
表二 多肽电泳条件
|
恒电压
|
150V
|
|
起始电流
|
60-75mA/板胶
|
|
结束电流
|
15-25mA/板胶
|
|
电泳时间
|
2.5-3小时
|
三. 染色
根据常规实验步骤，用配方6和7（表三）进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液（Cat No：RTD6201），该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
注：预染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝胶系统中迁移率会有不同，因此只能用来粗略估计目的蛋白的大小。如要精确确定蛋白的大小，请在同一凝胶系统中用非预染蛋白Marker来标定预染蛋白Marker的分子量。
表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
|
1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶）
货号： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉双丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，过滤后使用。
贮存：4℃
|
2. 40% PAA（19:1） （配制分离胶）
货号：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉双丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，过滤后使用。
贮存：4℃
|
3. 4×凝胶缓冲液（配制凝胶用）
货号：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris碱 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl调pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
贮存：4℃
|
|
4. 10×阳极缓冲液（下槽缓冲液）
货号：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris碱 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl调pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
贮存：4℃
注：使用前稀释成1×阳极缓冲液使用。
|
5. 10×阴极缓冲液（上槽缓冲液）
货号：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris碱 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用ddH2O溶解，定容至1000
ml(不用调pH)。
贮存：4℃
注：使用前稀释成1×阴极缓冲液使用
|
6. 染色液
货号：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考马斯亮蓝G-250 0.25 g
水 900 ml
|
|
7. 脱色液
货号：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
|
8. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml）
货号：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者400 μl β-巯基乙醇）；2
mg 考马斯亮蓝G-250；用灭菌水定容至10ml
混匀分装-20℃贮存备用
|
|
多肽电泳配套试剂
使用RTD6145 彩虹预染超低分子量Marker
II（3-40 kD）产品发表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹预染超低分子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458