彩虹预染超低分子量蛋白质Marker III（1.5-45 kD）

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III（1.5-45 kD）

●产品编号及规格：

RTD6147   10 T（50 μl）

● 储存、运输及效期：

  -20℃保存，湿冰运输，有效期1年。

● 产品简介：

    彩虹预染超低分子量蛋白质Marker III可以直接观察蛋白电泳及清晰判断Western Blotting的转膜效果。本产品由7种多肽和蛋白质组成，分子量大小为 1.5 kD，4 kD（红色），8 kD， 15 kD（绿色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非预染蛋白Marker标定过。)

● 使用说明：

第一次收到该产品，常温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底。

一. 制胶：

说明：可以根据以下步骤自己制备凝胶。也可以选择Tris-Tricine-PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6122）进行实验。

1.1 配制分离胶

1.1.1 按照表1将组份加入到小烧杯中混合。

1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

1.1.3 在玻璃板中迅速灌入适量分离胶溶液，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可（注：此溶液为过量，请勿全部注入）。然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。

1.1.4 静置15-30分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。分离胶25℃条件下，约20分钟可以聚合。

表1  （一块1 mm mini胶用量）

1.2 配制浓缩胶

1.2.1 去除覆盖在分离胶上的乙醇层，用滤纸将残留乙醇吸去。

1.2.2 按照表1将各组份加入到小烧杯中混合。

1.2.3 加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

1.2.4 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.2.5 静置30-60分钟装待凝胶聚合

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表1的标准条件调节促凝剂的加入量。浓缩胶25℃条件下，约40分钟可以聚合。

二. 电泳：

2.1 取Marker样品，充分混匀后备用。不要加热处理。

2.2 电泳前，将10×阳极缓冲液（Cat No：AB080）和10×阴极缓冲液（Cat No：CB010）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的外槽加入1×阳极缓冲液，内槽加入1×阴极缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，参考下表进行电泳，至每条带都清晰可见时停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。

表2 多肽电泳条件

三. 染色

根据常规实验步骤，用配方6和7（表3）进行染色和观察。如果使用配方6进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），该产品除具有染色快，无毒，灵敏性高等特点外，还能对小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。

表3 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制