尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
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货号
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名称
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规格
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RTD6163
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尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒
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50次
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● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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AC2914-02
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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RU5080
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尿素（电泳级）
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220 克
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RT
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5ml
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4℃，避光
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PL080-01
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5×MonoColor蛋白上样缓冲液(变性,还原)
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(变性电泳,粉末型)
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1 L
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RT
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说明书
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一份
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● 贮存、效期及运输：
按照标签温度贮存；有效期一年；常温运输。
● 产品简介：
本公司提供的尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。在SDS-PAGE中尿素作为辅助的变性剂，能与SDS一起彻底变性蛋白，特别是一些跨膜多次的蛋白，尿素辅助SDS可以彻底打开蛋白的高级结构。该产品可以用于Blue Native电泳分离后的二向电泳，也可以用于一些碱性蛋白如组蛋白，鱼精蛋白的变性电泳分离。
本试剂盒可配制至少50块常规大小（8×10 cm）1mm厚度的PAGE胶。
● 使用说明：
一. 配制分离胶（各试剂使用量请参考表1）
1.1 配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS溶液-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。
1.2按照表1将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
1.3 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5
cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
表1 SDS-PAGE分离胶配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量
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6％ 胶
5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
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尿素
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1.8
g
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3.6
g
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5.4
g
|
7.2
g
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4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
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1.25 ml
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2.5
ml
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3.75
ml
|
5
ml
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40％ PAA（29:1）
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0.75 ml
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1.5
ml
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2.25
ml
|
3
ml
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H2O
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定容至5ml
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定容至10 ml
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定容至15 ml
|
定容至20 ml
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TEMED
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0.005 ml
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0.01
ml
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0.015
ml
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0.02
ml
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10％ APS
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0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
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8％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
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|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
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4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
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40％ PAA（29:1）
|
1 ml
|
2
ml
|
3
ml
|
4
ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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10％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
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4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
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40％ PAA（29:1）
|
1.25
ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
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H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
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TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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12％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.5
ml
|
3
ml
|
4.5
ml
|
6
ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
|
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15％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
|
|
尿素
|
1.8
g
|
3.6
g
|
5.4
g
|
7.2
g
|
|
4×Tris/SDS分离胶buffer
pH8.8
|
1.25 ml
|
2.5
ml
|
3.75
ml
|
5
ml
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.875
ml
|
3.75
ml
|
5.625
ml
|
7.5 ml
|
|
H2O
|
定容至5ml
|
定容至10 ml
|
定容至15 ml
|
定容至20 ml
|
|
TEMED
|
0.005 ml
|
0.01
ml
|
0.015
ml
|
0.02
ml
|
|
10％ APS
|
0.05 ml
|
0.1
ml
|
0.15
ml
|
0.2
ml
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二. 浓缩胶制备：
2.1 去除覆盖在分离胶上的水层。
2.2
按照表2将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
2.3 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
2.4 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
2.5 静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表2 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
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组份
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不同凝胶体积对应各组份的取样量
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2 ml
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4 ml
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5 ml
|
10 ml
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尿素
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0.72 g
|
1.44 g
|
1.8 g
|
3.6 g
|
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4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8
|
0.5
ml
|
1
ml
|
1.25
ml
|
2.5
ml
|
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40％ PAA（29:1）
|
0.2
ml
|
0.4
ml
|
0.5
ml
|
1
ml
|
|
H2O
|
定容至2 ml
|
定容至4 ml
|
定容至5 ml
|
定容至10 ml
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TEMED
|
0.002
ml
|
0.004
ml
|
0.005
ml
|
0.01
ml
|
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10％ APS
|
0.02
ml
|
0.04
ml
|
0.05
ml
|
0.1
ml
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三. 电泳：
3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液的配制-1 L：
将一包5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。
3.2 电泳：
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。