糖蛋白染色试剂盒
产品编号
|
规格
|
运输
|
RTD6501
|
10次
|
RT
|
● 产品简介:
本产品用于PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上糖蛋白的检测。整个染色2.5小时完成。染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色。该试剂盒检测的灵敏度一般可以达到微克级别,但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关,可以用于 SDS-PAGE 和2D电泳的凝胶检测,也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测(但背景较高),还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。
按照每次使用25 ml糖蛋白染色试剂计算,本产品可以染色 8-10块mini-PAGE(8×10cm)胶或印迹膜。
● 产品组成:
产品编号
|
产品名称
|
规格
|
贮存
|
运输
|
RTD6501-1
|
氧化试剂
|
2.5 g
|
常温避光
|
RT
|
RTD6501-2
|
糖蛋白染色试剂
|
250 ml
|
常温避光
|
RT
|
RTD6501-3
|
还原试剂
|
1.25 g
|
常温避光
|
RT
|
RTD6501-4
|
阳性对照(辣根过氧化物酶)
|
1 mg
|
-20℃
|
RT
|
RTD6501-5
|
阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)
|
1 mg
|
-20℃
|
RT
|
PL080
|
5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液
|
1 ml
|
-20℃
|
RT
|
-
|
250ml棕色塑料瓶
|
2个
|
-
|
-
|
-
|
说明书
|
1份
|
-
|
-
|
● 储存条件
按照标签温度贮存,常温运输。开封后一年有效。
●实验前准备:
1.
配制 3%醋酸溶液:将 15 ml 自备的冰醋酸与 485 ml 超纯水混匀,常温保存备用。
2.
配制 50%甲醇溶液:将 250 ml 甲醇与
250 ml 超纯水混匀,常温保存备用。
3. 配制氧化试剂溶液: 将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250ml空塑料瓶中, 然后加入250
ml的超纯水,充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,常温保存备用。
4. 配制还原试剂溶液: 将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的
250ml 空塑料瓶中,然后加入 250 ml的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,常温保存备用。
5. 配制1×SDS-PAGE上样缓冲液:取0.4
ml 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液,加入1.6
ml超纯水,-20℃贮存备用。
6. 配制阳性对照(辣根过氧化物酶)溶液:向装有
1 mg 辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上样缓冲液,所得辣根过氧化物酶溶液的浓度即为
1mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用, 其余的放-20℃长期保存。 对于
8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加
10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。
7. 配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂)溶液:向装有
1 mg 大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE
上样缓冲液(自备),所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/ml,然后适量分装成8-10管, 留下一管当天使用,其余的放-20℃长期保存。对于
8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加
10 μl 的阳性对照溶液即可,上样前95℃处理5分钟。
8. 样品稀释:用 5×MonoClolor 蛋白上样缓冲液将样品浓度稀释为
1 mg/ml,SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为
1×。对于 8×10 cm的凝胶来说,每条泳道加 5-10 μl 的样品即可,上样前95℃处理5分钟。。
● 凝胶染色的操作步骤(膜染色从步骤3开始):
注意事项:
1.以下步骤仅针对0.75mm厚度大小8×10cm的凝胶,1-1.5mm厚度凝胶或更大体积凝胶适当增加液体体积并延长操作时间。
2. 请在通风橱中进行以下操作。
一. 固定:
取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶,在50 ml 50%甲醇溶液中,摇床慢摇30分钟,弃甲醇溶液。
二. 漂洗:
50 ml超纯水洗涤凝胶两次,每次摇床慢摇10分钟,弃超纯水。
三. 氧化:
凝胶中加入 25 ml 氧化试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。
四. 漂洗:
50 ml超纯水洗涤凝胶3次,每次摇床慢摇5分钟,弃溶液。
五. 染色:
凝胶中加入25 ml糖蛋白染色试剂,摇床慢摇15 分钟,糖蛋白会在5-10分钟内显现品红色。若检测的糖蛋白含量较低,适当延长显色时间。弃染色溶液。
注:若糖蛋白染色试剂中有晶体析出,只需取上清液即可,不要加热溶解晶体。
染色步骤会产生有刺激性气味气体,请在通风橱中操作。
六. 还原:
凝胶中加入 25 ml 还原试剂,摇床慢摇15分钟,弃溶液。此时凝胶背景略带红色。
七. 漂洗:
加入50 ml 3%醋酸溶液摇床慢摇洗涤胶块3次,每次10分钟,直至胶背景红色变浅,接近淡红色或无色,此时红色糖蛋白主带清晰可见。
八. 保存:
胶块保存在50 ml 3%醋酸溶液中。
● 实验记录表格
实验日期:
编号
|
步骤
|
体积
|
时间
|
|
|
凝胶尺寸 8×10 cm
|
0.75mm胶或膜
|
1
|
固定
|
50 ml
|
30 min
膜从步骤3开始
|
2
|
漂洗
|
2×50 ml
|
2×10 min
|
3
|
氧化
|
25 ml
|
15 min
|
4
|
漂洗
|
3×50 ml
|
3×5 min
|
5
|
染色
|
25 ml
|
15 min或更长
条带变为品红色
|
6
|
还原
|
25 ml
|
5 min
|
7
|
漂洗
|
3×50 ml
|
3×10 min
漂洗后凝胶背景变浅
|
8
|
保存
|
50 ml
|
-
|
实验示例:
蛋白转到NC膜后糖蛋白染色
使用RTD6501 糖蛋白染色试剂盒发表部分文章列表:
1. [IF=8.947] Adhesive
property and mechanism of silkworm egg glue protein.
Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu
Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li
Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong
Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512
Institution: Southwest University
Paper link:https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773
2. [IF=8.2] Conjugation
of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation
products via dielectric barrier discharge cold plasma.
Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song,
Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang,
Wupeng Ge.
Journal: International Journal of Biological
Macromolecules. 255 (2024)
128035
Institution: Northwest
A&F University
Paper link:https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.128035
3. [IF=6.1] Inhibiting
Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis:
Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.
Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.
Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154
Institution:Shanghai
Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences
Paper link:https://doi.org/10.1021/acs.jafc.3c04650
4. [IF=3.3] Similar
construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of
chiton biomineralization.
Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang,
Jingliang Huang
Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126
Institution:Hohai University,Sichuan University
Paper link:https://doi.org/10.1016/j.jprot.2024.105126
5. [2023 IF=4.8] Regulatory
effects of yam (Dioscorea opposita Thunb.) glycoprotein on energy metabolism in C2C12 and 3T3-L1 cells and on
crosstalk between these two cells.
Author: Weiye Li, Jian Shi, Xueping Wu, Hongyong Qiu, Chunhong Liu
Journal: Journal of Ethnopharmacology 338 (2025) 119013
Institution:College of Food
Science, South China Agricultural University
Paper link:https://doi.org/10.1016/j.jep.2024.119013