DNA退火缓冲液(5×)
● 产品组成：
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货号
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名称
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规格
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贮存
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RTE3105
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DNA退火缓冲液(5×)
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5×1ml
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-20℃
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● 保存：-20℃
● 产品简介：
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing
Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液，是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液，可用于常规的DNA oligo的退火，尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。该缓冲液能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接，转化后可以得到大量的阳性克隆。
本试剂操作简单，只需把待退火的DNA oligo和退火缓冲液按照一定比例混合后，置于PCR仪上进行程序降温，约90min即可完成。
● 操作步骤(仅供参考)：
1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌水配制成50μM，同时彻底溶解退火缓冲液（5×）备用。
2、 按如下反应体系操作：
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顺序
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组份
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体积
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1
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灭菌水
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40μl
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2
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退火缓冲液(5×)
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20μl
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3
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DNA oligo A(50μM)
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20μl
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4
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DNA oligo B(50μM)
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20μl
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Total
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100μl
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按照上述顺序，依次加入并混匀，如果所用PCR仪没有加热盖，可加入Mineral Oil防止液体挥发。
3、 按如下PCR仪的退火条件：
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步骤
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温度
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时间
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作用
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1
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95℃
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2min
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Oligo充分变性
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2
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每90s下降1℃，降至25℃
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约90min
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程序退火
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3
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-20℃
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长期保存
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暂时存放
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注：如果使用的PCR仪无梯度降温功能，也可以95℃处理后自然冷却至常温。