DNA尿素PAGE电泳试剂盒

货号	名称	规格	保存条件
AC2914-01	40%PAA(29:1)	100 ml	4℃
TB002	10×TBE	500 ml	RT
RU5080	尿素（电泳级）	220 g	RT
AP020P	APS（干粉）	5 ml	RT (配制后-20℃贮存)
TA0761-01	TEMED	0.5 ml	4℃，避光
DL080-01	2×TBE尿素上样缓冲液 (尿素变性胶)	1 ml	4℃

● 产品简介：

DNA尿素 PAGE 电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。

本公司提供的DNA尿素PAGE电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。

按照每次制备7 ml 10%凝胶（大小10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。

● 贮存和运输：

试剂盒按照标签温度贮存，有效期一年。试剂盒常温运输。

● 使用说明：

一、制备凝胶：

10% APS配制-5 ml：

将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期12个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

1.1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

1.2．分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。

表一 TBE-尿素PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于厚度1.0 mm小板胶)

单链DNA长度	最佳凝胶浓度	尿素（克）	40%PAA （29:1）	10×TBE	补水到总体积	10%APS	TEMED
200-1000 nt	5%	2.1克	0.625 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
50-400 nt	8%	2.1克	1 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
40-350 nt	10%	2.1克	1.25 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
30-300 nt	12%	2.1克	1.5 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
10-150 nt	15%	2.1克	1.875 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl
8-120 nt	20%	2.1克	2.5 ml	0.5 ml	5 ml	50 μl	5 μl

1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

1.4静置10-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

1.5去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

表二 TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表 (总体积2 ml，适用于1.0mm厚度胶)

	各组份体积（ml）
凝胶浓度	尿素	40%PAA（29:1）	10×TBE	灭菌水	10%APS	TEMED
4%	0.84克	0.2 ml	0.2 ml	补水2 ml	20 μl	2 μl

1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

二、电泳：

2.1. 预电泳：拔出梳子，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2-3次，去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。

注：试剂盒配套的10×TBE缓冲液仅够配制凝胶用，1×TBE电泳缓冲液请自己制备，配方如下：

终浓度	顺序	原料	1升	5 升
89 mM	1	Tris碱 [MW121.14]	10.8 克	54克
2 mM	2	EDTA 2Na·2H₂O [MW372.24]	0.744 克	3.72克
89 MM	3	硼酸 [MW61.83]	5.5 克	27.5克
	4	超纯水最后定容至	1 升	5 升
		最后pH在8.2-8.3之间，可以不用调节pH，记录每批pH

2.2. 取 3-5 μl样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液，70℃处理5 分钟后立即冰浴，上样。

2.3. 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。

	恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间	适用条件
推荐电压	200V	15-20 mA/板胶	10-15 mA/板胶	60+ min	最佳电压，最优的分辨率

2.4. 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。

变性胶浓度	溴酚蓝	二甲苯菁
5%	35 nt	130 nt
8%	19 nt	75 nt
10%	15 nt	55 nt
15%	10 nt	52 nt

三、染色：

3.1 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103），核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）或核酸快速银染试剂盒（货号：RTS5101）进行染色。

● 实验示例：

1. 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5103）染色：

2. 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒（货号：RTS5102）染色：

3. 使用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）染色：

4 使用核酸快速高灵敏度染色试剂盒（货号：RTS5101）染色：

相关产品请点击如下链接

核酸电泳试剂盒

使用RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒 产品发表部分文章列表：

1. [2022 IF=9.23] Precision-SELEX aptamer screening for the colorimetric and fluorescent dual-readout aptasensing of AFB in food.

Author: Ying Li, Boyu Jia, Pengyue Song, Nan Long, Linchun Shi, Peng Li, Jiabo Wang，Lidong Zhou, Weijun Kong

Product: RTE4102 DNA尿素PAGE电泳试剂盒

Journal: Food Chemistry 436 (2024) 137661

Institution：School of Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University

Paper link： https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2023.137661

只有购买过该商品的用户才能进行评价。[发表评价]