20bp DNA ladder

● 产品编号及规格：

RTM441          50次 (250 μl)    

● 产品组成：

● 产品简介：

本产品是由13条带状双链DNA条带组成的精准定量Marker，适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中DNA条带大小和含量的分析。13条带的大小分别为20，40，60，80，100，120，140，160，180，200，300，400，500 bp。其中100bp和200bp条带为加亮带，含量为100ng/5μl，其余条带浓度为50ng/5μl。

本产品为双链DNA Marker，适用于非变性的PAGE电泳和琼脂糖凝胶电泳，不适用于尿素PAGE电泳。由于片段较小，如使用琼脂糖分离，建议使用高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离。

按照每次上样5 μl计算，该产品可以使用50次。

● 储存条件：

 -20℃ 贮存,有效期3年。

● 使用方法：

一、 TBE-PAGE凝胶分离：

1、制备凝胶步骤：

1.1参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

1.2按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；最后加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

   注：20bp DNA ladder 适用于配制20%TBE-PAGE胶。

1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。

1.4静置10-20分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合

表一 TBE-PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于1mm厚度小板胶)

1.5去除覆盖在分离胶上的乙醇；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

表二 TBE-PAGE 4%浓缩配方表 (总体积1.5 ml，适用于1mm厚度小板胶)

1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

2、电泳：

2.1 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入1×TBE电泳液，1 ml吸头冲洗加样孔1-2次。

2.2 取待测样品，加入相应体积6×Native PAGE DNA上样缓冲液，如5 μl样品加1 μl 上样缓冲液，短暂离心后取5-10 μl上样。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齿梳子上样5 μl，其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。

2.3 连接电源线，打开电源开关。200V稳压电泳。至二甲苯菁指示前沿到达凝胶三分之二位置时结束电泳（此时溴酚蓝指示前沿已经跑出凝胶，不可见）。

3、染色：

3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3-5分钟。

3.2 染色液配制：

  TBE-PAGE胶可以使用EB或RealSafe类染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）进行染色。即用型染色液配制：

3.3染色和观察：

  凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40-60 rpm染色30 分钟。紫外光下观察。

二、 琼脂糖凝胶分离：

1. 琼脂糖凝胶制备：

  由于片段较小，建议选用高分辨率琼脂糖（货号AR1036）制胶。

以下步骤以制备50 ml 3%凝胶为例：

称取1.5 g琼脂糖于玻璃三角瓶中，加入50 ml 1×TAE，5 μl RealSafe Red核酸染料或其他核酸染料（如EB，GoldView），混匀，盖好瓶盖，微波炉中火加热至沸腾，轻摇混匀，重复1-2次至琼脂糖完全溶解，无可见颗粒。倒入制胶容器中，插好梳子，常温凝固30-50分钟至凝胶完全凝固。

2. 电泳：

取待测样品，加入相应体积6×DualColor DNA loading buffer，如10 μl样品加2 μl 上样缓冲液，短暂离心后取5-10 μl上样。 20bp DNA ladder  1 mm厚10齿梳子上样5 μl，其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。

建议电泳条件：凝胶浓度为3％，电泳电压8-10 v/cm（单位电压指电泳槽阴阳极之间的距离电压，如阴极阳极之间的距离为20 cm，可以用160-200 V电压进行稳压电泳），待溴酚蓝指示前沿距离凝胶末端2 cm时终止电泳，电泳时间35-40分钟。

注：3% 琼脂糖TAE电泳中，溴酚蓝大小约为20bp，二甲苯菁大小约200bp。

3. 紫外灯下观察条带。

注：使用EB或Goldview染料时，由于染料本身带正电荷较多，随着电泳时间的延长，染料会向阴极聚集，导致小片段核酸结合的染料含量降低，会出现小片段的DNA片段紫外灯下亮度变弱或不可见。此时可以将胶浸泡于含有染料的1×TAE缓冲液中染色15-20分钟即可看到小片段。

4. 实验示例：

使用RTM441 20bp DNA ladder产品发表部分文章列表：

1. [2022 IF=6] A novel ?uorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker ampli?cation strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Marker: RTM441，20bp DNA ladder

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution：School of Public Health, Hebei Medical University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340