10bp DNA ladder（10-100 bp）

本产品是由8条带状双链DNA条带组成的精准定量Marker，8条带的大小分别为10，15，20，25，30，40，50，100bp。其中25 bp条带为加亮带，含量为100 ng/5 μl，其余条带浓度为50ng/5μl。本产品为双链DNA Marker，适用于非变性的PAGE电泳，不适用于尿素PAGE电泳。由于片段长度很短，不建议用琼脂糖凝胶电泳分离。

按照每次上样5μl计算，该产品可以使用50次。

● 储存、效期及运输条件：

-20℃ 贮存;有效期3年；湿冰运输。

● 使用方法：

一、 TBE-PAGE凝胶分离：

1、制备凝胶步骤：

1.1参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

1.2按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；最后加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

注：10 bp DNA ladder 适用于配制20%TBE-PAGE胶。

1.3在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2 cm的无水乙醇，使凝胶表面保持平整。

1.4静置10-20分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合

表一 TBE-PAGE分离胶配方表 (总体积5 ml，适用于1mm厚度小板胶)

		各组份体积（ml）
最佳DNA分离范围	凝胶浓度	灭菌水	30%PAA（29：1）	5×TBE	10%APS	TEMED
70-450 bp	6%	3	1.0	1.0	0.05	0.005
60-460 bp	8%	2.66	1.34	1.0	0.05	0.005
50-300 bp	10%	2.33	1.67	1.0	0.05	0.005
40-200 bp	12%	2	2.0	1.0	0.05	0.005
25-150 bp	15%	0.5	2.5	1.0	0.05	0.005
5-100 bp	20%	0.66	3.34	1.0	0.05	0.005

1.5去除覆盖在分离胶上的乙醇；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

表二 TBE-PAGE 4%浓缩配方表 (总体积1.5 ml，适用于1mm厚度小板胶)

	各组份体积（ml）
凝胶浓度	灭菌水	30%PAA（29：1）	5×TBE	10%APS	TEMED
4%	1.0	0.2	0.3	0.02	0.002

1.6将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

1.7静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

2、电泳：

2.1 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入1×TBE电泳液，1 ml吸头冲洗加样孔1-2次。

2.2 取待测样品，加入相应体积6×Native PAGE DNA上样缓冲液，如5 μl样品加1 μl 上样缓冲液，短暂离心后取5-10 μl上样。 10 bp DNA ladder 1 mm厚10齿梳子上样5 μl，其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。

2.3 连接电源线，打开电源开关。200 V稳压电泳，至溴酚蓝指示前沿距离玻璃下沿1 cm时结束电泳。

TBE-PAGE电泳
恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间
200 V	20-25 mA/板胶	10-15 mA/板胶	50+min

20%T3.3C TBE-PAGE

3、染色：

3.1 漂洗：玻璃板上拆下凝胶后，适量蒸馏水漂洗3-5分钟。

3.2 染色液配制：

TBE-PAGE胶可以使用EB或RealSafe类染料后染染色，以下程序用RealSafe Red核酸染料（货号：GR002）进行染色。即用型染色液配制：

	即用型RealSafe核酸染色液
	100 ml
1×TBE	100 ml
RealSafe Red核酸染料	20 μl

3.3染色和观察：

凝胶浸泡于即用型染色液中，常温避光摇床40-60 rpm染色30 分钟。紫外光下观察。

4、实验示例：

20％TBE-PAGE电泳

左1-7：10,15,20,25,30,40,50 bp

右1：10 bp DNA ladder

凝胶长度8 cm

电压200 V 起始电流25 mA，终止电流13 mA

电泳缓冲液：1×TBE

电泳时间：50分钟

染色：RealSafe Red核酸染料后染30分钟

使用RTM443 10bp DNA ladder产品发表部分文章列表：

1. [2021 IF=8.025] A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins.

Marker :RTM443，10bp DNA ladder

Author: Lili Chang , Dan Wang, Cunzhi Peng, Qi Wang, Bingqiang Xu, Zheng Tong

Journal: International Journal of Biological Macromolecules 231 (2023) 123358

Institution：Key Laboratory of Biology and Genetic Resources of Tropical Crops, Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural

Sciences

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358

2. [2022 IF=6] A novel fuorescent sensor based on aptamer recognition and DNA walker amplication strategy and its determination of 17b-estradiol.

Author: Yajun Zhang, Licong Jia, Wei Wang, Meng Jiang, Hongying Zhang, LingMei Niu

Marker: RTM443，10bp DNA ladder

Journal: Arabian Journal of Chemistry. 16 (2023) 105340.

Institution：School of Public Health, Hebei Medical University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.arabjc.2023.105340

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