PAGE凝胶DNA回收试剂盒（吸附柱法）（目录号：RTP3104）

● 试剂盒内容及保存：

● 运输、储存条件和效期：

常温运输，常温保存，有效期为一年。

● 产品简介及使用说明：

本试剂盒适用于从PAGE 胶中回收50-500 bp 的双链DNA 片段，回收效率可达30-80%。该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，得到高质量的DNA回收产物。所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。

注：该试剂盒也能回收单链DNA片段，但回收效率偏低。

本试剂盒具有以下特点：

1. 适用范围广，回收效率高，对于50-500 bp之间的DNA片段，回收效率在30-80%。

2. 操作简单快速

3. 无需酚氯仿抽提，无需乙醇沉淀。

按照每次使用200 μl提取液A计算，试剂盒可以使用50次。

● 使用方法：

1.电泳：

PAGE电泳后染色观察DNA 并确定需要回收的DNA 条带的位置，确保目的DNA片段与其他片段分开。

2.切胶：

用干净的刀片小心切取含DNA片段的PAGE凝胶到一个干净的1.5 ml离心管中。

注：尽可能多地把多余的胶切除，否则多余的凝胶会降低DNA的回收效率。

3.DNA提取：

3.1 根据胶块重量，每100 mg胶块加200 μl比例加入提取液A（如胶块不足100 mg，用灭菌水补足100 mg），用塑料研磨杵充分将凝胶块捣碎。

注：胶的重量控制在0.3克以下为宜，否则会导致DNA片段扩散提取不完全。

3.2  55℃水浴30分钟，间隙混匀，促进凝胶中的DNA扩散到溶液中。

3.3  13000 rpm离心5分钟，小心将上清液(含DNA片段)转移到一个新的1.5 ml离心管中。

4. 上清液中依次加入3倍上清体积结合液B和1倍上清体积的助沉剂C，混匀。

注：如果此时溶液变为粉红色，请加入少量3MNaAc pH5.2（一般说来，10 μl足矣），使溶胶液变为黄色再上柱离心。

5. 将上一步所得溶液加入到吸附柱CA1中（吸附柱放入收集管中），常温放置2分钟，13,000 rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。

注：吸附柱CA1的有效容积为750 μl，如溶液体积大于750 μl，分次上柱，保证全部溶液都加到吸附柱中。

6. 向吸附柱CA1中加入700 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm离心60秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。

7. 向吸附柱CA1中加入500 μl漂洗液PW，13,000 rpm离心30-60秒，倒掉废液。

8. 将离心吸附柱CA1放回收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液。

注：此步必不可少！如果漂洗液有残留会影响回收效率和DNA质量，进而影响下游实验；离心后将吸附柱盖子打开，常温放置2分钟，这样将有助于彻底挥发残余乙醇。

9. 将吸附柱放到一个干净1.5 ml离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量65℃预热的洗脱缓冲液EB（一般不要少于30 μl），常温放置2分钟。13,000 rpm离心1分钟收集DNA溶液。

注：CA1柱的洗脱体积不应少于30 μl，体积过小将会降低回收效率；洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。由于PAGE胶中片段较小，不建议用水进行洗脱。

10. DNA产物-20℃保存。

● 实验示例：