Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂兼容型）

Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）

● 试剂盒内容及保存：

● 储存条件和效期：

考马斯亮蓝G-250染色液（去垢剂兼容型）4℃贮存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。试剂盒常温运输。

● 产品简介：

Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂兼容型)其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。该试剂盒进行了优化，能兼容一系列常见去垢剂和一定浓度的还原剂，并且检测数据有很好的线性关系。本试剂盒的性能不仅优于常规的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。

蛋白研究中许多蛋白样品都是含有去垢剂，因此常规Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢剂但检测比较耗时的BCA法。但BCA法无法兼容还原剂。当蛋白样品中同时含有一定浓度的去垢剂和还原剂时，常规的Bradford法和BCA法都无法使用，而本试剂盒仍然是可以检测的。试剂盒兼容蛋白提取的多种裂解液，包括 Western及IP细胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。

按照每个10 μl样品使用300 μl染色染色液计算，试剂盒可以至少检测800个样品。

● 产品特点：

1. 检测速度快，10-20个样品只需不足10分钟即可完成。

2. 灵敏度高，检测浓度下限可达25 μg/ml （测定浓度范围在50-1000 μg/ml内有较好的线性关系），最小检测蛋白量可达0.5 μg。

3. 该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1 M，DTT的浓度可高达5 mM。同时，此方法测定蛋白浓度可以兼容受高浓度的去垢剂影响，可以适用于膜蛋白样品的浓度测定。蛋白样品中SDS浓度低于1%，Triton X-100浓度低于1%，Tween 20, 60, 80浓度低于1%，NP-40浓度低于1%都可以定量。

● 操作方法：

用前注意事项：

蛋白标准请全部溶解混匀后再使用。

需可检测560-610 nm之间波长的酶标仪一台，最佳检测波长为595 nm。并需96孔微孔板。

微孔板测定程序：（最佳工作范围50-1000 μg/ml）

1． G-250染液在使用前应平衡温度至常温并温和颠倒混匀。

2． 1 mg/ml蛋白标准品配制：常温完全溶解蛋白标准品，取20 μl 5 mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入80 μl PBS溶液，使其终浓度为1 mg/ml。

3． 按照下表配制BSA标准测定溶液：

4． 取10 μl不同浓度蛋白标准加到96孔微孔板的蛋白标准孔中。

5． 将适当体积的待测样品加入到微孔板中，如果样品不足10 μl，用PBS补足到10 μl；

6． 向微孔板中加入300 μl G-250染色液，混匀，常温放置 3-5 min。

7． 用酶标仪测定A₅₉₅波长的吸光度，以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。可以立即测定吸光度，也可以在30分钟内测定，30分钟内检测数据无显著变化。对于不含去垢剂和含有某些去垢剂的情况，在2小时内检测数据无显著变化；对于含有某些特定去垢剂的情况，在2小时内检测数据会有一定的变化，但仍然会呈现较好的线性关系。

8． 以A₅₉₅为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

注：如使用分光光度计测定，可根据实际需要扩大溶液体积，保证蛋白标准溶液和蛋白样品与 G-250染液的体积比为 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白样品 50 μl，G-250染液试剂 1.5 ml。

 试剂盒对常见去垢剂的兼容性