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M-MLV(RNase H-) 反转录酶

M-MLV(RNase H-) 反转录酶

产品编号:RTR2102

产品规格:2000U

数量
价格 ¥200


Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-

       M-MLV反转录酶(RNase缺失)      

●  产品货号及规格:

货号

名称

浓度

包装

贮存

RTR2102-01

Reverse Transcriptase M-MLV

RNase H-

200U/μl

2000U

-20℃

RTR2102-02

5×RT buffer

5×

0.2 ml

-20

产品简介:

M-MLV反转录酶(RNase H-),是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比,缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性,不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA,可以合成长片段从DNA。

本产品中M-MLV反转录酶(RNase H-)的浓度为200 U/μl,用于体积为20微升的反转录体系时足够进行10次反转录反应。

特点:M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9-13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42-45并且在55时仍然有很高活性,可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。

用途:M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。

来源:该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达

活性定义:One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10 min at37. Enzyme activity is assayed in50 mMTris-HCl (pH 8.3),6 mMMgCl2,10 mMDTT,40 mMKCl,0.5 mMdTTP, 0.4 MBq/ml [3H]-dTTP0.4 mMpolyA?oligo(dT)12-18.

纯度:不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶,可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。

酶储存溶液:50 mMTris, pH 8.3,100mMNaCl,1 mMEDTA,5 mMDTT, 0.1% Triton X-100 and 50% glycerol。

5×RT buffer250 mMTris, pH 8.3 at25,250 mMKCl,20 mMMgCl2,50mM DTT。

失活或抑制:70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活;EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(Rnase H-)有抑制作用。

使用说明:

cDNA第一链合成:

1. 0.2ml PCR管中配制模板/引物变性混合液:

加样顺序

试剂

使用量

1

模板RNA

1 ng-1 μg*

2(后面3种任选一种)

Oligo(dT)18 primer(100 μM)

or Random primer(100 μM)

or Specific primer(10 μM)

0.5 μl

3

RNase-free

Up to 6 μl

注:* Total RNA 的使用量一般为1 ng-1 μg;mRNA的使用量一般为 10 pg-1 μg。

2.70保温 10 分钟后迅速在冰上急冷 2 分钟以上。

注:此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。

3. 离心数秒钟使模板 RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。

4. 在上述离心管中配制下列反转录反应液。

加样顺序

试剂名称

使用量

1

模板/引物变性混合液

6 μl

2

5×RT buffer

2 μl

3

10mM dNTP

0.5 μl

4(可选)

RNase Inhibitor(40U/μl)

0.25μl

5

M-MLV(RNaseH-)

0.25-1μl*

6

RNase-free

up to 10μl

* 当起始模板 RNA量>500 ng 时, M-MLV(RNase H-)的使用量应>0.25 μl。

5. 若使用Oligo(dT)18或基因特异性引物,42℃温育30 min;若使用随机引物,先30℃温育5 min,之后42℃温育30 min;

6. 70℃保温10分钟后冰上冷却,得到的 cDNA溶液可直接用于PCR扩增,PCR扩增时 cDNA溶液的推荐使用量50μl体系加2 μl。

注:cDNA溶液置于-20℃可保存半年;置于-80℃可长期储存。



引用RTR2102 M-MLV(RNase H-) 反转录酶发表文章

使用该产品发表部分文章列表:

1. [2018 IF=3.8] High-Throughput Sequencing Analysis of Small RNAs Derived from Coleus Blumei Viroids

Author: Dong-Mei Jiang , Meng Wang , Shi-Fang Li, Zhi-Xiang Zhang

Journal: Viruses 2019, 11, 619

Institution:Institute of Plant Protection,Chinese Academy of Agricultural Sciences

Paper linkhttps://www.mdpi.com/1999-4915/11/7/619

 


 
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