DNase I溶液（蛋白提取用）

DNase I Solution（for protein isolation）

●     产品组成：

● 保存：-20℃粉末未配制有效期3年；DNaseI配制成溶液后-20℃有效期一年。

● 产品简介：

脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)是一种非特异性核酸酶切酶，可用于降解单链或双链DNA，其原理为DNaseⅠ水解磷酸二酯键产生带有5'-磷酸基团和3'-OH的单核苷酸或寡核苷酸。   本产品能迅速水解核酸，降低粘度以减少处理时间和增加蛋白产量。该酶可以与细菌蛋白提取液和RIPA 裂解液等蛋白抽提试剂配合使用。

本产品RNase活性未检测，不能用于反转录反应（RT-PCR）中DNA的去除使用。RT-PCR中DNA污染的去除请选择RNase-free DNase I（货号：RTT2014）。

● 活性定义：

One unit of the enzyme completely degrades 1 μg of DNA in 10 min at37°C. 

● DNaseI溶解液组份：

20 mMsodium acetate pH 6.5, containing5 mMCaCl₂ and 0.1 PMSF, 50% (v/v) glycerol

● DNaseI失活或抑制：

加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。

● 使用方法：

 1、DNase I溶液的配制：取5ml DNase I溶解液全部加到DNase I粉末中，充分混匀，配成浓度为2000U/ml DNase I溶液。-20℃贮存。

2、蛋白提取液中按照1/100 体积加入DNase I溶液（使其终浓度为20U/ml），1/100体积加入1MMgCl₂，37℃处理30-60分钟。

   注：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase的消化能力。

3、继续后续蛋白提取实验。