过滤纸(类囊体提取用)
1 新鲜采集植物叶片(约30克),快速去除叶脉并将叶片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在120 ml的预冷的1×类囊体膜提取缓冲液(即用型)中(每克叶片加4 ml)。
2 将浸泡了叶片的溶液转移到电动匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机,可选货号:RT-2243A)中,低速匀浆5秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后,再低速匀浆5秒。注意:除电动匀浆机外,还可以选择玻璃匀浆器和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法,但这些方法的单次处理量都比较小,需要将样品分成很多小份单独匀浆,然后再汇集。注:不要用液氮研磨,会损伤类囊体膜;不要过度匀浆,把叶片打碎即可,否则会降低类囊体膜得率。
3 过滤匀浆液:2层过滤纸放于漏斗上,用漏斗将滤液收集到预冷的250 ml量筒中,一般分三次收集,总共可收集80-85 ml滤液,将滤液等分到4个预冷的50 ml的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35 ml)。