BL21(DE3)化学感受态细胞

目录号：RTX304

储存条件：-70℃冻存六个月

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产品简介：

本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

BL21(DE3)菌株介绍：

特点：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ 噬菌体DE3 区的lacUV5 启动子，该区整合于BL21 的染色体上。

(2)适用于T7、T7 lac 启动子的表达系统，如pET，pEASY。

(3) 适用于非毒性蛋白的表达。

(4) 使用pUC19 质粒DNA 检测，转化效率可达10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

以下实验以100 μl感受态细胞为例。

2   向感受态细胞悬液中加入目的DNA（50 μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3   将离心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。

4   向每个离心管中加入500 μl 无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素）， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟（150转/分钟），目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5将离心管内容物混匀，吸取100 μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时。

注：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4,000 rpm, 2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）

注意事项：

1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。

2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。