10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）
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产品编号
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产品名称
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规格
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TB1040
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10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）
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500 ml
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● 简介：
10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液（湿转，溶液型）可以用于Western时湿转转膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。为方便客户使用，10×转膜缓冲液中没有添加甲醇和SDS，客户根据需要配制1×转膜缓冲液时自行添加。
● 保存、运输和贮存：
常温保存，有效期两年。
配成溶液后建议4℃保存，有效期6个月。
1×即用型转膜缓冲液建议现用现配，不建议保存。
● 1×即用型转膜缓冲液配制方法：
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1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
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10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液
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100
ml
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变性蛋白
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非变性蛋白
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＜20 kD蛋白
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无水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超纯水
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定容至1升，不要调节pH，pH~8.3
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注：甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在胶上，而SDS让蛋白更加离开胶。因此对大蛋白转膜来说，多加SDS，少加甲醇；而对小蛋白转膜，多加甲醇，少加SDS。
● 转膜：
1. 膜的选择：转膜可以选择PVDF膜或NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20 kD蛋白选择0.45
μm孔径，低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。
蛋白转膜三明治制作：
负极（电转夹黑色面）-海绵垫-1层1
mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1
mm厚度滤纸-海绵垫-正极（电转夹白色面）
3. 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
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膜孔径
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蛋白大小
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稳流
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建议时间
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降温措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分钟
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分钟
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分钟
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小时
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需要
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