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10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转,溶液型)

10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转,溶液型)

产品编号:TB1040

产品规格:500ml

数量
价格 ¥180

10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转,溶液型)

产品编号

产品名称

规格

TB1040

10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转,溶液型)

500 ml

简介

10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液(湿转,溶液型)可以用于Western时湿转转膜,原始配方是  Towbin buffer(1×)(Towbin et al. PNAS 197976:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %,pH ~8.3。为方便客户使用,10×转膜缓冲液中没有添加甲醇和SDS,客户根据需要配制1×转膜缓冲液时自行添加。

保存、运输和贮存

常温保存,有效期两年。

配成溶液后建议4℃保存,有效期6个月。

1×即用型转膜缓冲液建议现用现配,不建议保存。

1×即用型转膜缓冲液配制方法:

 

 

即用型转膜缓冲液 配制量 1

 

10×Tris-甘氨酸转膜缓冲液

100 ml

 

 

变性蛋白

非变性蛋白

20 kD蛋白

无水甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白

无水甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白

无水甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超纯水

定容至1升,不要调节pHpH~8.3


注:甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在胶上,而SDS让蛋白更加离开胶。因此对大蛋白转膜来说,多加SDS,少加甲醇;而对小蛋白转膜,多加甲醇,少加SDS。

  转膜:

1. 膜的选择:转膜可以选择PVDF膜或NC膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来,大于20 kD蛋白选择0.45 μm孔径,低于20 kD选择0.22 μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化。


蛋白转膜三明治制作:

负极(电转夹黑色面)-海绵垫-1层1 mm厚度滤纸-凝胶-膜-1层1 mm厚度滤纸-海绵垫-正极(电转夹白色面)

3. 转膜条件:

以下转膜条件仅供参考,客户针对自己的目的蛋白,最好经过1-2次预实验后,确定最佳的转膜条件。

膜孔径

蛋白大小

稳流

建议时间

降温措施

0.22 μm

低于20 kD

200 mA

~30分钟

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分钟

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分钟

需要

0.45 μm

高于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小时

需要

 


 
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