TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)

TMB Color Development Solution for IHC or Blotting

●       产品简介：

TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根过氧化物酶或其他适当过氧化物酶的催化下，TMB 会产生蓝色产物。TMB 显色液（沉淀型，组化或膜HRP显色用，TMB Color Development Solution for IHC or Blotting）采用最新的单一溶液的 TMB 显色技术，用于 Western 或免疫组化等 HRP的显色检测，简化了操作步骤，并且使检测结果更加稳定可靠。本显色液具有高灵敏性，与 HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。

? 本试剂盒主要适用于免疫组化或原位杂交时HRP的显色检测，以及Western、Southern、Northern等HRP的膜显色检测；本显色液也可以用于原位检测细胞或组织内源性的过氧化物酶。由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。

? 用于免疫组化检测时，如果每个样品的显色液用量为0.1ml，则可以检测1000个样品；对于膜的显色检测，如果每次使用2.5 ml显色液，则可以检测40次。

● 保存条件：

2-8℃避光保存；一年有效。

● 使用说明：

? 如果发现TMB显色液出现混浊或颜色变成蓝色，应该停止使用。

一. 免疫组化检测：

1. 参考免疫组化的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2. 洗涤完毕后，去除洗涤液，滴加约100微升TMB显色液。

3. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可在湿盒中显色过夜)，直至显色至预期深浅。

4. 去除染色液，加入重蒸水孵育10分钟以终止反应。

5. 拍照记录或适当封片后拍照记录。如果有必要，可以使用中性红染色液进行复染后再进行拍照记录或适当封片后拍照记录。

二. 膜的HRP显色检测：

1. 参考相应的实验步骤，在与辣根过氧化物酶标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟左右。

2. 洗涤完毕后，去除洗涤液，

3. 滴加约适量TMB显色液充分覆盖膜。

4. 室温避光孵育3-30分钟或更长时间(可长达数小时)，直至显色至预期深浅。

5. 直接拍照记录。

● 常见问题：

一. 背景显色太深。

1. 如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

2. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

二. 没有显色或显色太弱。

 1. 适当提高一抗或二抗的浓度。在离心管内用稀释的二抗与染色液反应，检测二抗是否可以被正常显色。 

2. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。

3. 可以适当延长显色时间。

4. 如果上述改进不能获得预期效果，对于免疫组化或Western，可以考虑更换效果更好的一抗；对于Southern、Northern或原位杂交，则可以考虑更换探针。

实验示例：

样品：K562细胞,SDS裂解液(Cat:RL1060)提取总蛋白；
电泳：4-20%RealPAGE Tris-Glycine预制胶(Cat:RTD6117-0420)
转膜：RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020),0.45μmPVDF膜，400 mA 30 min
封闭：Western封闭液I（BSA）（Cat：WB1070）常温封闭60min
一抗：Anti-PCNA抗体（鼠单抗）（Cat：APM5012） 1:5000  RT 60min；
二抗：HRP标记羊抗鼠IgG（Cat：HGM1060） 1:5000  RT 60min；
显色：TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)（Cat：TM1026），显色1分钟

使用TMB显色液发表部分文章列表：

1. [2022 IF=9.22] A HCR based multivalent aptamer amplifier for ultrasensitive detection of Salmonella.

Author: Mengni Sun, Na Ma, Hanxing Shi, Ling-Zhi Cheong, Wenge Yang, Zhaohui Qiao

Product: TM1026 TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)

Journal: Sensors and Actuators:B.Chemical  2023,375,132860

Institution：College of Food and Pharmaceutical Sciences, Ningbo University

Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0925400522015039