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超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)
 产品货号: RTD6127
 产品名称: 超低分子量蛋白Marker IV(3.3-45kD)
 产品价格/规格: 10次 200元
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 更新时间: 2018-08-27
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  • 超低分子量蛋白Marker IV3.3-45kD


    产品编号及规格:

    RTD6127   10T50μl

    储存条件: -20℃保存,开封后有效期12个月。

    产品简介:本产品包含2种多肽和3种低分子量蛋白质组成,分子量范围为3.3kD-45kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。 

     

     

    使用说明:

    第一次收到该产品,室温融化后,彻底混匀,离心快甩将溶液完全收集到管底,根据需要适量分装成小管,-20℃贮存,每次取一小管使用;本产品每次使用前,95加热处理5分钟

    . 制胶:

    I 配制分离胶

    1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA19:1)、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。

    2.加入10%APSTEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

    3.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层,使凝胶表面保持平整。

    4.静置5-10分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

    表一  (一块0.75mm mini胶用量)

     

    分离胶

    浓缩胶

     

    18T, 5%C /6.0 ml

    5T, 3.3%C/2 ml

    40% PAA19:1

    2.7 ml

    /

    40% PAA (29:1)

    /

    0.25 ml

    4×多肽电泳凝胶缓冲液

    1.5 ml

    0.5 ml

    乙二醇(电泳级)

    1.8 ml

    /

    ddH2O

    /

    1.25 ml

    10APS

    50-65 μl

    20 μl

    TEMED

    6 μl

    2 μl

    注:如非必须,不要使用1.0mm1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。


    II 配制浓缩胶

    去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。

    1.按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA(29:1)和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。

    2.加入10%过硫酸铵和TEMED,立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

    3.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    4.静置20-30分钟装待凝胶聚合

    . 电泳:

    1. 取一管分装好的Marker样品,彻底融化,95加热处理5分钟,充分混匀后备用。

    2. 电泳前,将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液(Cat No:CB010)用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液,轻柔拔出梳子,将Marker或蛋白样品(样品已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No:TP050]处理)加入点样孔,根据表二条件进行电泳,至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注:如果电泳时间过短,染色时,指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。

    表二 多肽电泳条件

    恒电压

    150 V

    起始电流

    45-55 mA

    结束电流

     10-15 mA

    电泳时间

    2-3小时

    . 染色

    根据常规实验步骤,用配方5和6(表三)进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性,请选择本公司的FastBlue蛋白染色液(Cat NoRTD6202,该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色,不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离,是常规染色液的理想替代品。

    表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

    1. 40%PAA29:1)(配制浓缩胶)

    Cat No:AC2914

       丙稀酰胺       38.67g

       甲叉双丙稀酰胺 1.33g

     ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4避光保存

    2.  40% PAA19:1 (配制分离胶)

    Cat No:AC1914

    丙稀酰胺      38 g

    甲叉双丙稀酰胺 2 g

    ddH2O溶解后定容至100 ml,过滤后使用。

    贮存:4避光保存

    3. 4×多肽电泳凝胶缓冲液(配制凝胶用)

    [3MTris; 0.3% SDS; pH8.45]

    Cat No:GB010

    Tris 182g

    ddH2O   300ml

    1.5 g SDS15ml 10 SDS

    HClpH值至8.45

    ddH2O定容至500ml

    贮存:4

    4. 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液

    [1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]

    Cat No:CB010

    Tris 121.14g

    Tricine 179.2g

    SDS10g

    ddH2O溶解,定容至1000ml(不用调pH)

    贮存:4

    注:使用前稀释成缓冲液使用

    5. 染色液

    冰醋酸            100 ml

    甲醇              450 ml

    考马斯亮蓝G-250  0.25 g

                    450 ml

     

    6. 脱色液

    冰醋酸  100ml

          900ml

    7.  2×Tricine蛋白样品上样缓冲液(10ml

    Cat No:TP050

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31g DTT(或者400μl β-巯基乙醇)

    2mg 考马斯亮蓝G-250

    用灭菌ddH2O定容至10ml

    混匀分装-20贮存备用

     


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