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RTD6136 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒
 产品货号: RTD6136
 产品名称: RTD6136 Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒
 产品价格/规格: 10次 1500元
 产品说明书: 点击查看
 更新时间: 2020-10-22
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  • Blue/Clear 非变性凝胶电泳试剂盒

       Blue/Clear Native PAGE Electrophoresis Kit  Ver.700763

    货品内容:

    组份

    货号

    名称

    规格

    保存

    1

    RTD6135-0312

    3-12% RealPAGE Native BN/CN 预制胶(12 )

    10

    4

    2

    BC500P

    10×BN/CN PAGE电泳缓冲液(干粉)

    500 ml

    RT

    3

    PL114

    4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

    1 ml

    -20

    4

    BC250

    0.4% G-250染料(电泳用)

    100 ml

    4

    5

    BC260

    5% G-250染料(上样用)

    1 ml

    4






    7

    说明书

    一份

    产品简介:

    Blue/Clear Native PAGE(BN/CN-PAGE)是一种从生物样品(质膜,胞浆等)中分离分子量10 kD-10 M kD 范围的蛋白质复合物的电泳技术。其原理是用温和去污剂(如 DDM,digitonin)将蛋白复合体从细胞膜中以近似天然的状态分离出来,Blue Native PAGE (BN-PAGE)是用考马斯亮蓝 G-250 代替 SDS与蛋白结合而使其带负电荷,根据蛋白分子量不同在 PAGE胶中得到分离;Clear Native PAGE(CN-PAGE)是电泳缓冲液中不加入任何染料,电泳中始终保持蛋白的天然电荷和活性状态,然而,其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外,BN-PAGE由于考马斯亮蓝G-250存在,使蛋白都覆盖上负电荷,可以分离碱性蛋白(pI>7);而CN-PAGE只适合于酸性蛋白(pI<7)的分离。

    本产品包括BN/CN-PAGE制胶的所有成分,方便使用。可以用于分离分子量在 10 kD-10M kD 的蛋白复合体,样品可以来于胞浆、细胞总裂解液、细胞膜、线粒体膜和叶绿体膜等。电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交、SDS-PAGE电泳、蛋白纯化、蛋白活性检测等分析实验,也可直接用于电洗脱制备蛋白。

    ● 运输和贮存:

    本产品常温运输;组份按照标签温度贮存;有效期一年。

    使用说明:

    1. 样品制备:

       该试剂盒不含样品制备的相关试剂,样品具体制备方法参考Blue Native PAGE. Wittig I, Braun H, Schagger H. Nature Protocols. Vol 1,No 1,418,2006.

    2. 电泳:

    2.1 拆开预制胶包装,将预制胶安装在合适的电泳槽中。

    注:试剂盒配套预制胶兼容伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell,天能VE-180,六一24K系列电泳槽。不兼容Thermol,六一其他系列,君意东方,百晶等电泳槽。

    2.2 准备电泳缓冲液:

    将10×BN/CN PAGE电泳缓冲液(干粉)溶于500 ml灭菌水中,彻底溶解,测定pH应为7.0左右,不要调节pH。用前稀释10倍即配成1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。

    2.2.1 CN-PAGE电泳:

    阳极缓冲液和阴极缓冲液均直接使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液进行电泳。

    2.2.2 BN-PAGE电泳:

    阳极缓冲液使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液,阴极缓冲液按照下表配制:

     

    1×蓝色阴极缓冲液

     

    150 ml

    10×BN/CN PAGE电泳缓冲液

    15 ml

    0.4% G-250 染料(电泳用)

    0.75 ml

    超纯水

    定容至150 ml

    2.3准备样品:

    2.3.1 CN-PAGE电泳:

    总体积

    10 μl

    蛋白样品

    x μl

    4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

    2.5 μl

    超纯水

    补至10 μl

     

    不要加热

    2.3.2 BN-PAGE电泳:

    总体积

    10 μl

    10 μl

     

    含去垢剂样品*

    不含去垢剂样品

    蛋白样品

    x μl

    x μl

    4×BN/CN-PAGE蛋白上样缓冲液

    2.5 μl

    2.5 μl

    5% G-250染料(蛋白上样)

    0.25-1 μl

    0.1 μl(终浓度0.05%

    超纯水

    补至10 μl

    补至10 μl

     

    不要加热

    不要加热

    * 含去垢剂样品中染料加入按照以下原则:

    样品中G250终浓度为去垢剂终浓度的1/4

    例如样品中DDM终浓度为1%,则需要G-250终浓度为0.25%。10 μl蛋白样品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

    2.4电泳过程;

    2.4.1 CN-PAGE电泳:

    电泳内外槽均使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。在电泳槽的内槽内加入1×BN/CN PAGE电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔),轻轻拨出预制胶梳子,用1ml吸头冲洗加样孔3次,随后在电泳槽外槽加入适量的1×BN/CN PAGE电泳缓冲液。

    2.4.2 BN-PAGE电泳:

    BN-PAGE电泳外槽使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液;内槽开始电泳使用的是1×蓝色阴极缓冲液,等待电泳指示前沿到达凝胶1/3处时,将电泳缓冲液更换为1×BN/CN PAGE电泳缓冲液,继续后续电泳,因为过多染料会影响蛋白的转膜实验。

    电泳条件

    CN-PAGE电泳

    BN-PAGE电泳

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    恒电压

    起始电流

    结束电流

    电泳时间

    150V

    mA/板胶

     

     

    150V

    20-25 mA/板胶

    5-8 mA/板胶

    60+ min


    3. 转膜:

    BN-PAGE转膜必须用PVDF膜,不能用NC膜,因为NC膜与G-250结合非常紧密。转膜缓冲液使用1×BN/CN PAGE电泳缓冲液即可。

    4. 染色:

    4.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量FastBlue蛋白染色液或常规考马斯亮蓝染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

    4.2 摇床常温摇动10-15分钟至条带清晰可见。

    4.3 加入适量蒸馏水脱色,期间更换1-2次蒸馏水,摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。

    4.4 观察保存结果。


    4.5 实验示例:





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