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超低分子量蛋白电泳试剂盒
 产品货号: RTD6120
 产品名称: 超低分子量蛋白电泳试剂盒
 产品价格/规格: 10次/1000元
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 更新时间: 2018-02-02
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  •  超低分子量蛋白电泳试剂盒(货号:RTD6120)

    ●     产品组成:

    组分货号

    组分

    名称

    规格

    贮存

    运输

    RTD6120-01

    组分1

    2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

    15 ml

    4

    常温

    RTD6120-02

    组分2

    2×多肽电泳分离胶缓冲液

    30 ml

    4

    常温

    RTD6120-03

    组分3

    2×PAA溶液 超低浓缩胶用

    15 ml

    4

    常温

    RTD6120-04

    组分4

    2×PAA溶液 超低分离胶用

    30 ml

    4

    常温

    AP020P

    组分5

    10% APS(干粉)

    5 ml

    常温

    常温

    TA0761-01

    组分6

    TEMED

    0.5 ml

    常温

    常温

    CB010P

    组分7

    10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)

    500 ml(干粉)

    常温

    常温

    TP050

    组分8

    2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂)

    1 ml

    -20

    常温

    RTD6202-02

    组分9

    FastBlue蛋白染色液

    500 ml

    常温

    常温

    产品简介:

    本试剂盒含有超低分子量蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂,可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。具有以下特点:

    1 适用范围广:2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS,适用于多肽的变性和非变性电泳。

    2 分辨率高:凝胶缓冲液独特配方,可以有效分离1-5kD多肽。

    3 稳定性高:凝胶缓冲液pH为中性,存放时间长。

    4 使用方便:配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可配制凝胶。

    贮存和效期:

    按照标签温度贮存;开封后有效期一年。

    使用说明:

    . 10% APS配制:

    10% APS配制-5 ml将APS干粉溶于5 ml灭菌水中,彻底溶解后分装,1 ml/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10%APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

    . 制胶:

    I 配制分离胶

    1.按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

    表一  (一块1 mm mini胶用量)*

     

    分离胶

    浓缩胶

     

    18T /5 ml

    5T /2 ml

    2×多肽电泳浓缩胶缓冲液

    /

    1 ml

    2×多肽电泳分离胶缓冲液

    2.5 ml

    /

    2×PAA溶液 超低浓缩胶用

    /

    1 ml

    2×PAA溶液 超低分离胶用

    2.5 ml

    /

    10APS

    45-60 μl**

    20-30 μl

    TEMED

    5 μl

    2 μl

    注: * 如非必须,不要使用厚度1.5mm的凝胶,尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶,这样会减少电泳后染色和脱色的时间。

    ** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

    表二 超低凝胶制备凝固时间表

    环境温度

    20

     

    分离胶配制

    浓缩胶配制

    分离胶配制量

    5 ml

    -

    浓缩胶配制量

    -

    2 ml

    10%APS

    50 μl

    20 μl

    TEMED

    5 μl

    2 μl

    凝固时间

    5-10 分钟

    20-30 分钟

    2.在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液,然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层,使凝胶表面保持平整。

    3.静置5-10分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

    II 配制浓缩胶

    去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。

    1.按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合;立即混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。

    2.将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

    3.静置20-30分钟待凝胶聚合

    . 电泳:

    10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制:

    将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一干净的一升烧杯中,加入500ml超纯水,彻底搅拌混匀,不要调节pH,即配成500ml 10×TTS缓冲液。

     

    表三 1×TTS缓冲液配制

     

    1×TTS配制量 500 ml

    1×TTS配制量 1000 ml

    10×TTS

    50 ml

    100 ml

    超纯水

    450 ml

    900 ml

    注:伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

     

    将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液,轻柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗干净,将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat NoTP050]处理)加入点样孔,稳压电泳(表四),至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

    表四 多肽电泳条件

    恒电压

    150V

    起始电流

    60-75mA/板胶

    结束电流

    15-25mA/板胶

    电泳时间

    2.5-3小时

     

    . 染色(使用组分9-FastBlue蛋白染色液):

    用前必读:

    1 使用前如发现瓶中有少许沉淀,请混匀后使用。

    2以下“使用方法”是针对0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝胶染色程序。

    使用方法:

    1. 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中,加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适),条带1-2分钟即可见。

    2. 摇床上常温摇动10-15分钟。

    3. 观察结果。

    注意事项:

    1. 使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝胶,如果使用更大面积或更厚的凝胶,请加入更多的染色液并延长染色的时间。

    2. 常规染色所需的漂洗,固定,脱色步骤都无必要。

    3. 本染色液可以重复利用1-2次,敏感性会有轻微下降,请延长染色时间。

    4. 本染色液有轻微腐蚀性,请带手套操作。使用后,请盖好瓶盖,常温密封保存。

     

     

    缓冲液配方:

    1. 10x Tricine-Tris-SDS缓冲液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

    组分浓度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

    Tris base 121.1 g

    Tricine    179.2 g

    SDS         10 g

    ddH2O      to1 L 

    Do not adjust the pH (~pH 8.3)

    2. 2×Tricine蛋白样品加样缓冲液(10ml)  (Cat No:TP050)

    组分浓度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

    1ml 1MTris-Cl pH6.8

    2.4ml 甘油

    0.8g  SDS

    0.31gDTT

    2mg 考马斯亮蓝G-250

    用灭菌ddH2O定容至10ml

    混匀分装-20℃贮存备用


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