Bradford蛋白浓度测定试剂盒（去垢剂还原剂兼容型）

● 试剂盒内容及保存：

● 储存条件和效期：

考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存；牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。

● 产品简介：

Bradford蛋白质浓度测定试剂盒（去垢剂还原剂兼容型）是根据考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合，使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm，在一定的线性范围内，反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比，测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。该产品经过配方优化，兼容一定浓度的还原剂和去垢剂。

每个试剂盒可以检测1000个样品（使用微孔板）或60个样品（使用试管）

● 产品特点：

1. 检测速度极快，10个样品只需不足10分钟即可完成。

2. 灵敏度高，检测浓度下限可达25μg/ml （测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系），最小检测蛋白量可达0.5μg。

3. 该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，DTT的浓度可高达50 mM。同时，此方法测定蛋白浓度可以兼容受高浓度的去垢剂影响，可以适用于膜蛋白样品的浓度测定。蛋白样品中SDS浓度低于0. 1%，Triton X-100浓度低于1%，Tween 20, 60, 80浓度低于1%，NP-40浓度低于1%都可以定量。

● 操作方法

微孔板测定程序：（工作范围25-1000 μg/ml）

1．  G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；

2．  1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入80μl PBS溶液，使其终浓度为1 mg/ml。

3．  按照下表配制BSA标准测定溶液：

4．   

5．  将适当体积的待测样品加入到微孔板中，并用PBS补足到20 μl；

6．  向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；

7．  测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

8．  以A₅₉₅为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

试管测定程序：（工作范围25-1000 μg/ml）

1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀；

2. 1mg/ml蛋白标准品配制：室温完全溶解蛋白标准品，取100 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液，加入400 μl PBS溶液，使其终浓度为1.0 mg/ml。

3. 按照下表配制BSA标准测定溶液：

4. 将适当体积的待测样品加入到试管中，并用PBS补足到100 μl；

5. 向试管中加入2 ml G-250染色液，混匀，室温放置3-5分钟；

6. 测定595 nm 处的吸光值，并记录读数；以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。

7. 以A₅₉₅为纵坐标，BSA含量为横坐标，绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内，请稀释样品后重新测定。

 ● References：

1.Bradford, M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54.

实验示例：