Bradford蛋白浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)
● 试剂盒内容及保存:
货号
|
产品名称
|
包装
|
贮存方式
|
RTP7104-01
|
考马斯亮蓝G-250 plus染色液
|
200 ml
|
4℃
|
|
牛血清白蛋白(BSA)标准溶液(5 mg/ml)
|
2×1 ml
|
-20℃
|
|
PBS溶液
|
10 ml
|
4℃
|
|
说明书
|
1份
|
|
● 储存条件和效期:
考马斯亮蓝G-250染色液4℃避光保存;牛血清白蛋白标准溶液-20℃贮存。PBS溶液4℃贮存。本试剂盒有效期1年。
● 产品简介:
Bradford蛋白质浓度测定试剂盒(去垢剂还原剂兼容型)是根据考马斯亮蓝G-250(Coomassie
brilliant blue G-250)法研制而成,其原理是考马斯亮蓝G-250在酸性条件下和蛋白质结合,使得染料最大吸收峰从465nm变为595nm,在一定的线性范围内,反应液595nm处吸光度的变化量与反应蛋白量成正比,测定595nm处吸光度的增加即可进行蛋白定量。该产品经过配方优化,兼容一定浓度的还原剂和去垢剂。
每个试剂盒可以检测1000个样品(使用微孔板)或60个样品(使用试管)
● 产品特点:
1. 检测速度极快,10个样品只需不足10分钟即可完成。
2.
灵敏度高,检测浓度下限可达25μg/ml (测定浓度范围在50-1000μg/ml内有较好的线性关系),最小检测蛋白量可达0.5μg。
3.
该试剂盒测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,DTT的浓度可高达50 mM。同时,此方法测定蛋白浓度可以兼容受高浓度的去垢剂影响,可以适用于膜蛋白样品的浓度测定。蛋白样品中SDS浓度低于0. 1%,Triton X-100浓度低于1%,Tween 20, 60, 80浓度低于1%,NP-40浓度低于1%都可以定量。
● 操作方法
微孔板测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml)
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
2. 1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取20μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入80μl PBS溶液,使其终浓度为1 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液:
4.
编号
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
|
1 mg/ml BSA 标准溶液 μl
|
BSA标准溶液 μl
|
0
|
0.5
|
1.5
|
2.5
|
5.0
|
7.5
|
10
|
15
|
20
|
PBS 溶液 μl
|
20
|
19.5
|
18.5
|
17.5
|
15
|
12.5
|
10
|
5
|
0
|
BSA终浓度 μg/ml
|
0
|
25
|
75
|
125
|
250
|
350
|
500
|
750
|
1000
|
总体积 μl
|
20 μl
|
5. 将适当体积的待测样品加入到微孔板中,并用PBS补足到20 μl;
6. 向微孔板中加入200 μl G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;
7. 测定595 nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
8. 以A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
试管测定程序:(工作范围25-1000 μg/ml)
1. G-250染液在使用前应平衡温度至室温并温和颠倒混匀;
2. 1mg/ml蛋白标准品配制:室温完全溶解蛋白标准品,取100 μl 5mg/ml BSA蛋白标准溶液,加入400 μl PBS溶液,使其终浓度为1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA标准测定溶液:
编号
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
|
1 mg/ml BSA 标准溶液 μl
|
BSA标准溶液 μl
|
0
|
2.5
|
7.5
|
12.5
|
25
|
35
|
50
|
75
|
100
|
PBS 溶液 μl
|
100
|
97.5
|
92.5
|
87.5
|
75
|
65
|
50
|
25
|
0
|
BSA终浓度 μg/ml
|
0
|
25
|
75
|
125
|
250
|
350
|
500
|
750
|
1000
|
总体积 μl
|
100 μl
|
4. 将适当体积的待测样品加入到试管中,并用PBS补足到100 μl;
5. 向试管中加入2 ml G-250染色液,混匀,室温放置3-5分钟;
6. 测定595
nm 处的吸光值,并记录读数;以不含BSA 的样品的光吸收值作为空白对照。
7. 以A595为纵坐标,BSA含量为横坐标,绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。如果所得到的蛋白浓度不在标准曲线范围内,请稀释样品后重新测定。
● References:
1.Bradford,
M.M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 72:248-54.
实验示例: